【摘 要】
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目的:川崎病（Kawasaki disease,KD）,即皮肤黏膜淋巴结综合征是一种小儿急性发热出疹性血管炎性疾病,好发于5岁以下儿童,其病理特征为全身中小血管炎,主要累及冠状动脉,导致冠状动脉扩张或冠状动脉瘤等冠状动脉病变,是儿童发生后天性心脏病的危险因素之一。目前KD流行病学调查认为感染因素是KD的病因之一,发现肺炎支原体（Mycoplasma pneumoniae,MP）感染可能与KD相关。
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目的:川崎病（Kawasaki disease,KD）,即皮肤黏膜淋巴结综合征是一种小儿急性发热出疹性血管炎性疾病,好发于5岁以下儿童,其病理特征为全身中小血管炎,主要累及冠状动脉,导致冠状动脉扩张或冠状动脉瘤等冠状动脉病变,是儿童发生后天性心脏病的危险因素之一。目前KD流行病学调查认为感染因素是KD的病因之一,发现肺炎支原体（Mycoplasma pneumoniae,MP）感染可能与KD相关。故本研究旨在验证MP与KD之间的相关性,并探讨可能的发病机制。方法:1.MP感染与KD相关性分析:纳入2015年1月至2018年12月中国福建省妇幼保健院诊断KD的儿童,分为MP感染KD组和非MP感染KD组,提取病历一般资料、临床表现、实验室指标、超声心动图结果,使用IBM SPSS对数据进行描述性分析,计量资料采用t检验或秩和检验、计数资料采用χ2检验进行单因素分析,对有统计学意义的资料进行Logistic回归分析。2.体外实验探讨MP致KD发病机制:（1）炎症指标检测:以不同浓度Mp-LAMPs处理HCAEC,用Western Blot、RT-PCR及ELISA检测各组细胞中细胞间黏附分子-1（Intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1）、血管细胞粘附分子-1（Vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1）、肿瘤坏死因子-α（Tumor necrosis factor-α,TNF-ɑ）、白介素-6（Interleukin-6,IL-6）、乳酸脱氢酶（Lactate dehydrogenase,LDH）、诱导型一氧化氮合酶（Inducible nitric oxide synthase,i NOS）的表达水平;（2）细胞线粒体功能及自噬检测:以不同浓度Mp-LAMPs、羰基氰化物间氯苯腙（Carbonyl cyanide m-chlorophenyl hydrazone,CCCP）、环孢素A（Cyclosporin A,Cs A）、Mp-LAMPs+CCCP及Mp-LAMPs+Cs A处理HCAEC,通过荧光显微镜观察各组细胞的线粒体结构、线粒体膜电位及活性氧（Reactive oxygen species,ROS）含量变化,并检测三磷腺苷（Adenosine triphosphate,ATP）含量变化及线粒体自噬相关信号磷酸酶和紧张素同源物诱导激酶1（Phosphatase and tensin homologue-induced putative kinase 1,PINK1）、Parkin、P62、LC3的表达水平。结果:1.本研究共纳入330名KD患儿,其中MP感染KD患儿159名、非MP感染KD患儿171名。两组患儿的年龄（1.57岁VS 1.42岁,P=0.000）、发热天数>10天的患儿比例（27.0%VS 16.4%,P=0.034）、血钠（134.38mmol/L VS135.71mmol/L,P=0.019）、前白蛋白（11.43mg/d L VS 12.73mg/d L,P=0.025）、白蛋白（35.90g/L VS 36.91g/L,P=0.042）及小冠状动脉瘤发生率（57.8%VS69.0%,P=0.035）有显著差异;Logistic回归分析结果显示MP感染（OR:0.515;95%CI:0.309-0.860;P=0.011）、血钠（OR:0.910;95%CI:0.851-0.972;P=0.005）和前白蛋白（OR:0.900;95%CI:0.854-0.949;P≤0.001）是KD小冠状动脉瘤的相关因素。2.在HCAEC中,与空白对照组（未予特殊处理）相比发现Mp-LAMPs处理组ICAM-1、VCAM-1、i NOS、TNF-ɑ、IL-6及LDH的表达增加,并呈浓度依赖性。3.在HCAEC中,与空白对照组（未予特殊处理）相比发现Mp-LAMPs处理组细胞线粒体膜电位降低、ATP含量减少、ROS累积及线粒体自噬增强,且加入CCCP起促进作用,而加入Cs A起抑制作用。4.在HCAEC中,与空白对照组（未予特殊处理）相比发现Mp-LAMPs处理组PINK1、Parkin和LC3表达上调,而P62表达下调。结论:1.MP感染与KD存在一定相关性,合并MP感染的KD患儿年龄更大、发热时间更长,血钠、白蛋白及前白蛋白水平更低,MP感染、血钠和前白蛋白水平是KD小冠状动脉瘤的相关因素。2.在HCAEC中,Mp-LAMPs可诱导PINK1/Parkin通路介导的线粒体自噬,上调LC3表达,下调P62表达,协同氧化应激,促进炎症反应,促进炎症介质TNF-ɑ、IL-6、ICAM-1、VCAM-1及LDH的释放,导致HCAEC炎性浸润,引起冠状动脉病变。
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