论文部分内容阅读
背景:肝细胞肝癌是常见的恶性肿瘤之一,在全球癌症死因中位列第三。我国是肝病大国,为肝癌的高发区。由于肝癌易转移、复发率高,且对放化疗不敏感,导致其治疗效果和预后都很差。因此,如果能寻找到可以有效的抑制肝癌转移、增强肝癌对放化疗敏感性的新型药物,这将在改善肝癌的预后方面具有重要的意义。精氨酸酶(Arg)不仅可以通过分解L-精氨酸产生尿素和鸟氨酸参与体内氨解毒过程,而且还可以通过其下游产物促进组织再生、细胞增殖等参与炎症触发的肿瘤免疫逃逸、纤维化、免疫抑制等病理过程。一氧化氮合酶(NOS)可与Arg竞争底物L-精氨酸,产生一氧化氮(NO)。NO在肿瘤的起始、进展和转移等多个重要的肿瘤相关过程中都扮演着非常重要的作用:NO对肿瘤的作用依赖于其浓度水平,低浓度的NO可以促进肿瘤的进展;而高浓度的NO则发挥细胞毒作用,可诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤的进展和转移。但是抑制Arg后能否增加NOS的表达,从而产生高浓度的NO达到抑制肿瘤的目的尚不清楚。目的:通过观察精氨酸酶抑制剂nor-NOHA对HepG2肝癌细胞增殖和凋亡的影响,以及对HepG2肝癌细胞侵袭和迁移的影响,来探讨nor-NOHA对HepG2肝癌细胞的具体作用并初步探索其机制。方法:采用CCK-8法检测(0.0、0.5、1.0、2.0、3.0)ng/μL nor-NOHA作用后人肝癌HepG2细胞增殖的情况;流式细胞术检测nor-NOHA对HepG2细胞凋亡的影响。Western blot法检测nor-NOHA对细胞内精氨酸酶-1(Arg-1)、p53、基质金属蛋白酶2(MMP-2)以及上皮钙黏素(E-cad)蛋白表达的影响;实时荧光定量PCR检测诱导型一氧化氮合酶(i NOS)m RNA的表达;Griess法检测各组HepG2细胞产生的一氧化氮(NO)浓度;Transwell实验及细胞划痕实验测定HepG2细胞的侵袭、迁移能力。结果:1、通过CCK-8实验发现,浓度为1.0、2.0、3.0ng/μL的nor-NOHA处理的HepG2细胞组的存活率较对照组明显降低(P<0.05);通过流式细胞术发现,nor-NOHA组细胞凋亡率较对照组明显升高(P<0.05)。2、Western-blot结果发现,nor-NOHA组HepG2细胞内p53、E-cad表达较对照组明显升高(P<0.05),Arg-1、MMP-2表达明显降低(P<0.05)。3、实时定量PCR结果显示,nor-NOHA处理组的i NOS m RNA的表达较对照组明显升高(P<0.05)。Griess法检测结果表明,经nor-NOHA处理后,HepG2细胞产生的NO显著增加(P<0.05)。4、Transwell实验及细胞划痕实验证实,nor-NOHA处理组HepG2细胞的迁移侵袭能力较对照组明显降低(P<0.05)。结论:1、nor-NOHA抑制HepG2细胞的增殖并诱导其凋亡,这个过程与高浓度的NO上调p53蛋白的表达有关。2、nor-NOHA通过下调Arg的表达,使i NOS表达升高产生高浓度的NO,从而使E-cad表达增高、MMP-2表达降低,导致HepG2细胞的侵袭和迁移能力下降。