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山茱萸为山茱萸科植物山茱萸Cornus of ficinalis Sieb.et Zucc.的干燥成熟果肉,是中医临床常用的名贵传统滋阴补肾、抗衰老药物之一。本论文旨在研究山茱萸炮制前后二氯甲烷部位对衰老模型在药效学及化学方面的影响。选取与抗衰老相关的药效学指标,进行炮制前后的药效学比较,结合整体药理实验和细胞药效学,体内和体外药物化学分析来研究山茱萸炮制前后该部位的变化来阐明药效的差异。本论文研究内容分为以下几个方面:
(一)通过查阅文献,对山茱萸进行了资源分布、采收加工、炮制历史沿革、现代炮制方法、药理作用和化学成分的研究,探求前人对山茱萸进行炮制的意图。
(二)研究了山茱萸炮制前后二氯甲烷部位对自然衰老小鼠的免疫功能的影响;对血清、脑匀浆、肝匀浆SOD活力的影响;并对衰老小鼠肝、肾、脾病理切片进行了研究;以脾脏、胸腺、骨髓细胞凋亡及细胞周期状况影响作为研究指标,较系统地比较了山茱萸二氯甲烷部位炮制前后的药效变化。实验结果显示,对于肝、肾保护,生、制品之间无显著差异;对脾脏的保护,制品作用胜于生品。而二氯甲烷部位制品在对免疫功能,SOD活力方面有增强作用;对脾脏、胸腺、骨髓细胞周期影响有增强作用。总体来说,制品作用胜于生品。
(三)通过D-半乳糖造衰老小鼠模型实验,证明D-半乳糖衰老模型能出现不同程度衰老症状。本试验指标包括:免疫功能,血清及脑匀浆SOD、NO、NOS。实验结果显示,炮制后的山茱萸二氯甲烷部位在增强免疫功能方面胜于生品。生、制品在SOD指标上药效无显著差异。NO,NOS指标中,生、制品血清样本无显著差异,脑匀浆样本中,制品效果胜于生品。
(四)本部分是山茱萸生、制品二氯甲烷部位及活性成分山茱萸裂苷对体外细胞的实验研究。研究结果表明:山茱萸二氯甲烷部位对巨噬细胞有增殖作用;对损伤的人胚肺细胞、肝细胞、星形胶质细胞均有保护作用。总体来说,水煎部位药效胜于总提部位,制品药效胜于生品。山茱萸裂苷作为山茱萸中的一个活性成分,对肝细胞及星形胶质细胞都有显著效果,其抗衰老作用有待于进一步深入研究。
(五)采用HPLC法对山茱萸炮制前后二氯甲烷活性部位进行研究,发现炮制后二氯甲烷部位5-羟甲基糠醛含量增加了2.5倍,山茱萸二氯甲烷部位主要成分5-羟甲基糠醛在自然衰老小鼠与D-半乳糖致衰老小鼠血清中均为入血成分。但自然衰老小鼠与D-半乳糖致衰老小鼠脑匀浆中均检测不到5-羟甲基糠醛成分。