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[目的]1.检测NDM-1阳性CRKP对各类常见抗菌药物的敏感性,指导临床用药;分析携带NDM-1阳性CRKP患者的临床感染特征;多位点序列分型(MLST)分析NDM-1阳性CRKP分子流行特征,明确NDM-1阳性CRKP的流行情况和菌株克隆性;2.探究NDM-1阳性CRKP菌株的毒力表型和毒力基因携带情况,为研究NDM-1阳性CRKP耐药性和致病性关系提供帮助。[方法]1.收集昆明某三甲医院2018年1月-2019年6月临床标本中分离的非重复CRKP 310株,PCR扩增blaNDM-1筛选NDM-1阳性菌株;回顾性分析患者的临床感染特征(包括年龄、性别、入院时间、科室、标本类型、进行侵袭性操作、抗生素使用情况等);Vitek-2 Compact全自动微生物分析系统联合纸片扩散法(K-B法)和E-test法进行药敏试验;用多位点序列分型(MLST)分析26株NDM-1阳性CRKP分子流行特征。2.收集同期分离的NDM-1阴性CRKP 30株和CSKP 30株作为对照组,所有菌株采用拉丝实验和结晶紫半定量生物膜形成实验初步评估菌株毒力表型,PCR联合基因测序检测常见高毒力荚膜基因(K1、K2、K5、K20、K54、K57)及常见毒力相关基因(entB、ybtS、ureA、ycf、WabG、FimH、uge、iutA、KfuB、aero、rmpA、magA、Alls、IrnN 和 VatD)。[结果]1.NDM-1阳性CRKP检出26株,其中16株分离于2018年至2019年,检出率为5.16%,另外10株由前期课题组分离于2013年至2014年。患者以新生儿及老年患者为主,标本类型以痰液的分离率最高,科室主要来自于NICU,患者住院时间在9-100天不等,平均住院天数为36天,26名患者中17名患者进行了侵入性操作,26名患者均使用了抗生素,其中13名患者使用了碳青霉烯类抗生素。药敏结果显示NDM-1阳性CRKP菌株对常用抗菌药物表现为高度耐药,仅对复方新诺明34.60%和阿米卡星57.69%耐药率较低,同时26株菌对替加环素和多粘菌素B表现为敏感。26株NDM-1阳性CRKP经MLST分型为6个ST型,其中 ST11 型 14 株,ST105 型 4 株,ST36 和 ST37 各 3 株,ST433 和 ST1137 各 1株;6株来源于NICU的菌株中5株为ST11型,显示我院存在小范围克隆性播散。2.毒力表型试验、高毒力荚膜血清型及常见毒力基因携带情况:①26株NDM-1阳性CRKP及30株NDM-1阴性CRKP拉丝实验均为阴性,30株CSKP中21株拉丝实验为阳性;②NDM-1阳性CRKP生物膜形成能力按强、中、弱分类的比例分别为67%、24%和9%;NDM-1阴性CRKP分别为63%、24%和13%;CSKP组为57%,27%和16%。NDM-1阳性CRKP和NDM-1阴性CRKP生物膜形成能力测定值A590分别为0.5766±0.085和0.6178±0.1072,二者无统计学差异(t=0.817,P=0.966)。CRKP 菌株 A590 值为 0.6008±0.0966,CSKP 菌株的A590 值为 0.6273±0.1557,二者无统计学差异(t=0.46,P=0.849);③NDM-1阳性 CRKP和NDM-1阴性 CRKP 中未检测到 K1、K2、K5、K20、K54、K57荚膜血清型,CSKP中检测到K1型15株,K2型7株,K5型1株,K57型2株;④NDM-1阳性CRKP的毒力基因以entB、ureA、ybtS、FimH和ycf分布最为广泛,阳性率分别为100%、96%、96%、77%和88%;统计学分析表明NDM-1阳性CRKP组和NDM-1阴性CRKP组的15种毒力基因p值均>0.005,无统计学意义。NDM-1阳性CRKP组和NDM-1阴性CRKP组中未检出rmpA、Alls、aero、magA、vatD和IroN毒力基因;CSKP中,除VatD外其余14种毒力基因均被检测到,经统计学分析iutA、kfuB、aero、rmpA、magA、Alls和FimH毒力基因,CRKP组和CSKP组P<0.005,存在统计学差异;⑤NDM-1阳性CRKP组和NDM-1阴性CRKP组携带毒力基因种类以6种或者7种最为常见,最多携带8种毒力基因,而CSKP组主要携带9-11种毒力基因。[结论]1.NDM-1阳性CRKP耐药严重,MLST分型主要是ST11型,医院内NICU存在小克隆播散。2.CRKP毒力基因携带率低于CSKP,本研究目前未发现携带blaNDM-1的高毒力CRKP。