食品安全问题直接关系到环境安全和人类健康,随着全球化进程的加快和环境因素的影响,已成为当前世界性公共卫生热点之一。其中食源性致病菌是引起食品安全问题的重要原因之一。在国内常见的食源性致病菌中,金黄色葡萄球菌和沙门菌属于两种重要的食源性致病菌。金黄色葡萄球菌在环境中广泛存在,大部分金黄色葡萄球菌会产生肠毒素(Staphylococcal Enterotoxin,SEs)。SEs是引起金黄色葡萄球菌食物中毒的主要致病因子,可导致急性胃肠炎。肠毒素SE型别众多,根据其不同的抗原性可分为约20个型别。因此鉴定金黄色葡萄球菌是否含有肠毒素和肠毒素型别为金黄色葡萄球菌引起的食物中毒诊断提供病因学证据。针对现有酶联免疫法(ELISA)成本高昂,只能鉴定SEA~SEE这5种SE;普通PCR法操作繁琐,容易污染,可能产生假阳性等缺点,本文开展了基于多重连接探针熔解曲线(multiplex ligation reaction based on probe melting curve analysis,MLMA)的16种金黄色葡萄球菌肠毒素鉴定方法的研究。结果显示:多重连接探针熔解曲线方法最低检出限为0.80-2.15 ng/u L,特异度100%,无交叉荧光信号产生,变异系数(CV)小于1%。在158株金黄色葡萄球菌中共鉴定出124株金黄色葡萄球菌肠毒素阳性,和普通PCR方法相比,基于MLMA的金黄色葡萄球菌肠毒素鉴定方法的灵敏度为95.4%,特异度为100%,Kappa值为0.88。该方法快速,准确和特异性强。沙门菌(Salmonella)为重要的食源性致病菌,沙门菌感染引起的食源性疾病居于全球食源性疾病的前二位。沙门菌血清型种类繁多,与人类疾病密切相关的沙门菌血清型有100多种。沙门菌不同血清型因其遗传结构差异和寄生的宿主类型不同,导致其不同血清型的沙门菌流行特征不同。因此能够快速,准确地鉴定不同的沙门菌血清型对沙门菌的预防控制,危险因素分析乃至临床诊疗都具有重要的意义。传统沙门菌血清型分型方法操作繁琐,结果受主观因素影响较大;多重PCR法易污染;现有多重荧光PCR法覆盖血清型种类少,通量低;液相芯片法技术操作繁琐,易污染,价格昂贵。本文开展基于MLMA的常见30种沙门菌血清型分子鉴定方法的研究,体系最低检出限为1.04-1.56 ng/u L。通过本体系鉴定常见30种沙门菌、并以其他34种沙门菌血清型、大肠杆菌、志贺菌和奇异变性杆菌菌株作对照,结果显示:该体系可特异性检出相对应的抗原,从而准确鉴定沙门菌血清型,无交叉反应,特异性良好。以传统血清分型方法作为对照,采用新建立的探针熔解曲线方法检测431株临床沙门菌菌株,评估新建立的方法灵敏度、特异度和符合性,结果显示:基于MLMA的常见30种沙门菌血清型鉴定方法的灵敏度为99.5%,特异度100%,Kappa值为0.89,变异系数(CV)均小于1%。该体系实现了快速,准确鉴定常见30种沙门菌血清型的目的,有望替代传统血清学鉴定法,减轻工作量,提高准确性。综上所述,本论文建立了基于多重连接探针熔解曲线的16种金黄色葡萄球菌肠毒素和常见30种沙门菌血清型分子鉴定的方法,该方法灵敏度较高,特异性强,检测通量高,具有良好的推广应用前景。