树脂DEAE-E/H固定化氨基酰化酶的研究与乙酰-DL-蛋氨酸酶拆分液分离

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本文系统地测定了树脂DEAE-E/H的各种物理与化学参数对酶固定化可能产生的影响; 最终选定树脂8/4/12作为氨基酰化酶的固定化载体并作吸附研究和固定化酶评价; 改进了乙酰-DL-蛋氨酸的酶拆分液分离工艺,从而提高了分离效率和产品纯度。固定化载体决定固定化酶的酶活和性质,因此本文从载体筛选入手,在已有实验研究的基础上,选择树脂DEAE-E/H系列的三个产品:12/4/12、8/4/12、4/4/6为研究对象,从功能基含量,比表面,孔径分布,交联度,固定化酶活等多方面比较,最终选定树脂8/4/12作为氨基酰化酶的固定化载体,实验发现固定化酶活最高可达956U/g。通过对比实验分析确定,自由酶溶液浓度为2.0mg/ml时,能使固定化酶活和酶活力收率同时达到峰值; 振荡吸附达到最佳效果的时间确定为8小时。在测定吸附等温线过程中发现酶蛋白吸附属非单分子层吸附,并且上柱循环固定化的效果要好于振荡固定化。考察了固定化酶的最适反应温度、pH值、热稳定性等反应条件,确定固定化氨基酰化酶对乙酰-DL-蛋氨酸的拆分没有明显的底物抑制现象。采用阳离子交换树脂柱对乙酰-DL-蛋氨酸的酶拆分液进行分离,实验结果证实这一工艺不仅可以有效地分离纯化L-蛋氨酸,还可以兼得乙酰-D-蛋氨酸,且二者的收率分别达到了85%以上和75%左右。最后提出了双柱耦联模型,以期获得更高的拆分效率。总之,通过对树脂载体物理和化学性能的研究,不仅可以在一定程度上预测它作为载体的效果,也为拆分氨基酸工艺的改进提供了理论依据。固定化酶的反应条件及分离工艺中各个参数的优化组合可以很大程度提高产品的纯度和分离效果,为工业化的实现奠定基础。
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