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目的探讨抗癌生物活性肽(Anticancer biological activity peptide,ACBP)对人肺癌NCI-H226、NCI-H460、NCI-H1299、A549和A549/DDP细胞hedgehog信号通路的影响,进一步明确ACBP的抗肿瘤机制。方法体外分别培养五株人肺癌细胞,采用MTT比色法检测ACBP对肺癌细胞生长增殖的抑制作用,通过细胞苏木精-伊红(HE)染色、Annexin-V/PI染色、细胞迁移-划痕实验、流式细胞术(FCM)等技术检测细胞形态、细胞膜结构、细胞凋亡、细胞迁移能力和细胞周期的改变;应用Western-Blot方法检测Gli2和Gli3的蛋白表达,荧光定量PCR方法检测Gli2、Gli3和miR-132/212基因的表达变化。结果(1)MTT检测显示,ACBP对肺癌细胞生长增殖具有较强的抑制作用,并呈浓度-效应依赖性;与5-Fu单独用药比较,ACBP/5-Fu作用后对肺癌细胞的IC50降低。(2)细胞HE染色显示:ACBP和ACBP/5-Fu组处理细胞24h后,细胞形态出现明显的凋亡特征,如细胞核变小、染色质浓缩、出现凋亡小体等;5-Fu组细胞出现死亡,但凋亡特征少见。(3)细胞迁移-划痕实验可见,与对照组比较,各组药物作用20h后,均呈现抑制肺癌细胞迁移能力的作用,ACBP和ACBP/5-Fu组作用比5-Fu更显著。(4)FCM检测发现,经ACBP和ACBP/5-Fu处理细胞24h后,Annexin-V/PI双染结果显示细胞发生的凋亡率较对照组增多(P<0.01)。5-Fu组处理细胞24h后,与对照组比较,除NCI-H226细胞凋亡没变化,其他四株细胞均出现凋亡率增加(P<0.05)。FCM分析各组细胞周期变化显示,作用24h后,各组均显示阻滞细胞周期于G0/G1期的变化。(5)Western-Blot检测发现,与对照组比较,ACBP和ACBP/5-Fu处理细胞24h后,肺癌细胞Gli2蛋白表达降低(P<0.01),Gli3蛋白表达增加(P<0.01)。5-Fu组处理细胞24h后,与对照组比较,Gli2和Gli3蛋白表达没有变化。(6)荧光定量PCR检测发现,ACBP和ACBP/5-Fu组Gli2基因表达降低(P<0.01),Gli3基因表达增加(P<0.01),miR-132和miR-212基因表达均降低(P<0.01)。5-Fu组处理细胞24h后,与对照组比较,Gli2、Gli3和miR-132/212基因表达没有变化。结论(1)ACBP对分化不同的人肺癌NCI-H226、NCI-H460、NCI-H1299、A549和A549/DDP细胞有显著的生长增殖抑制作用。研究证实(1)ACBP可能抑制人肺癌细胞hedgehog信号通路之后,诱导其细胞凋亡,阻滞细胞周期于G0/G1期。(2)ACBP有效抑制肺癌细胞miR-132/212家族的表达,间接作用于肺癌细胞hedgehog信号通路,抑制肺癌细胞转移能力;(2)ACBP与5-Fu联合用药可增加5-Fu对分化不同的人肺癌NCI-H226、NCI-H460、NCI-H1299、A549和A549/DDP细胞的增殖抑制,增加5-Fu抗肿瘤活性。