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目的:原发性喉癌指原发部位在喉部的肿瘤，以鳞状细胞癌(90％)最为常见。喉癌治疗包括手术、放疗和化疗等多种治疗方法。根据病情的分期可选择一种，或多种方法相结合的治疗方式。环氧化酶-2(Cyclooxygenase-2，COX-2)，是催化花生四烯酸合成前列腺素(Prostaglandin，PG)过程中的关键酶，在体内存在COX-1和COX-2两种同工酶。近年来大量研究表明COX-2在多种肿瘤中都存在异常增高表达，在其发病过程中发挥着重要作用。关于COX-2在肿瘤中的作用机制，目前研究表明其可以通过多种途径作用于肿瘤发病过程。前期实验[1]已经证实选择性COX-2抑制剂尼美舒利(nimesulide，NIM)可以通过诱导细胞凋亡，抑制细胞增殖的途径抑制人喉鳞癌Hep-2细胞裸鼠移植瘤生长。本实验进一步就NIM对喉鳞癌Hep-2细胞裸鼠移植瘤微血管密度(Microvessel density，MVD)、COX-2、血管生成因子-2(Angiopoietin-2，Ang-2)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblastgrowth factor, bFGF)表达的影响进行观察和研究，以期进一步为NIM用于喉鳞癌的治疗提供理论依据。
方法:粱灼萍[1]等在前期试验中，将喉鳞癌Hep-2细胞接种于裸鼠背部皮下，建立移植瘤模型。将裸鼠随机分为实验组和对照组各六只，实验组予裸鼠腹腔注射NIM(50mg/kg/2d，0.2ml);对照组予裸鼠腹腔注射0.2ml生理盐水。用药4周后，处死裸鼠并获得瘤体。本实验选用粱灼萍实验所获得的喉癌Hep-2细胞裸鼠移植瘤，运用免疫组织化学技术检测CD31在喉癌裸鼠移植瘤组织中表达来定位瘤体中的MVD，运用图像分析系统作平均光密度值测定，并比较两组间的差异;分别采用免疫组织化学染色技术检测喉癌裸鼠移植瘤组织中COX-2、Ang-2和bFGF蛋白的表达情况，运用图像分析系统计算平均光密度值并比较实验组与对照组中COX-2、Ang-2、bFGF蛋白表达情况;采用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR)方法检测喉癌移植瘤组织中COX-2，Ang-2和bFGF mRNA的表达，并对两组移植瘤组织中COX-2、Ang-2和bFGF mRNA灰度值进行比较;运用直线相关分别分析实验组中COX-2、Ang-2、bFGF蛋白表达水平与MVD值的相关性。
结果:(1)免疫组织化学SP法检测裸鼠移植瘤中CD31表达得到平均MVD值，实验组为12.83±3.06，与对照组25.50±4.85(t=-5.412，P＜0.05)相比有统计学意义，表明选择性COX-2抑制剂NIM干预后移植瘤内血管生成减少;(2)利用免疫组织化学SP法检测裸鼠移植瘤组织中COX-2、Ang-2、bFGF蛋白表达，实验组中COX-2蛋白表达光密度为(38.12+15.56)，与对照组(140.92±23.12)比较显著下降，差异有统计学意义(t=-9.825，P＜0.05)，实验组Ang-2蛋白表达为(49.02±7.67)，经统计学分析与对照组(110.04±6.76)比较差异有统计学意义(t=-14.607，P＜0.05);实验组bFGF蛋白表达为(62.25±7.50)，经统计学分析与对照组(119.04±17.30)比较差异有统计学意义(t=-7.391，P＜0.05);(3)运用RT-PCR技术检测移植瘤中COX-2、Ang-2和bFGF mRNA表达，NIM治疗组COX-2 mRNA表达为(0.70±0.18)，对照组为(2.20±0.38)，经统计学分析差异有统计学意义(t=-9.825，P＜0.05); NIM治疗组Ang-2 mRNA灰度值为(0.49±0.03)，对照组为(0.98±0.10)，经统计学分析差异有统计学意义(t=-11.509，P＜0.05); NIM治疗组移植瘤中bFGFmRNA表达为(0.65±0.08)，对照组为(1.19±0.19)，经统计学分析差异有统计学意义(t=-6.209，P＜0.05)。(4)相关性分析:运用直线相关分析方法分别检测实验组移植瘤组织中COX-2、Ang-2、bFGF蛋白表达水平与MVD相关性，经统计学分析存在相关性，其相关系数r分别为0.832，0.944，0.844（P均＜0.05）。
结论:(1)选择性COX-2抑制剂NIM可以抑制人喉鳞癌Hep-2细胞裸鼠移植瘤中血管生成;(2)实验组中COX-2、Ang-2、bFGF蛋白表达水平分别与MVD表达水平呈正相关，后两者为血管生成促进因子，其与MVD的相关性表明其在肿瘤血管生成中作用显著;(3)使用NIM后，移植瘤组织中Ang-2和bFGF蛋白及mRNA表达水平都降低，表明NIM抑制人喉鳞癌Hep-2细胞裸鼠移植瘤血管生成的机制可能与抑制Ang-2及bFGF表达有关;(4)选择性COX-2抑制剂NIM可通过多种机制抑制人喉鳞癌Hep-2细胞裸鼠移植瘤的生长，有望为未来喉鳞癌综合治疗提供新的思路和手段。