乳品质量安全备受关注，使针对各种花样繁多的掺假检验方法成为乳品质量安全控制的关键。本课题运用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）法和酶联免疫吸附（ELISA）法分析牛乳固有蛋白成分及其含量，获得了乳源蛋白电泳分析图谱，并建立了分别以牛β-酪蛋白（β-CN）和β-乳球蛋白（β-Lg）为目标蛋白的竞争ELISA和间接ELISA检测体系，实现了对牛乳固有蛋白的多指标定性定量分析。　　 检测牛乳蛋白的SDS-PAGE电泳技术研究。选用原料牛乳和脱脂牛乳进行电泳，采用脱脂牛乳进样，分离胶浓度为17％、浓缩胶浓度为3％的不连续垂直稳流电泳，实验可以得到比较好的乳蛋白分离分析图谱。用大豆蛋白粉和牛乳清粉配制系列掺假样品进行SDS-PAGE电泳，所得图谱结合凝胶图像分析系统可知：SDS-PAGE可以检测出牛乳中掺入的非乳源蛋白（大豆蛋白粉）和乳源蛋白（牛乳清粉），其检出限分别为0.79％和4.4％。再用市售婴幼儿乳粉对所建立的电泳检测方法进行验证，实验证明电泳技术是一种直观、有效的乳蛋白检测方法，能够应用于乳及乳品质量监控。　　 乳源蛋白质的特异性鸡卵黄抗体制备。选择牛β-酪蛋白和β-乳球蛋白2种免疫原分别免疫临产蛋鸡，收集免疫后的高免鸡蛋，采用水稀释法，经过膜过滤、盐析、DEAE FF离子交换、亲和色谱等步骤，得到纯化IgY样品（anti-β-CN IgY、anti-β-Lg IgY），其纯度高达90％，每个卵黄中可获得100 mg～130 mg的特异性IgY，ELISA效价（稀释起始浓度均为1mg/ml）在1：2048～1：4096。anti-β-Lg IgY抗体与其相应抗原反应特异性良好，但anti-β-CN IgY与β-Lg和大豆蛋白粉交叉反应明显，采用抗体修饰技术增强其特异性，得到blocked anti-β-CNIgY可用于ELISA检测。　　 两种乳源蛋白质抗原的酶标记技术研究。为建立竞争ELISA检测体系，选用HRP（辣根过氧化物酶）通过过碘酸钠氧化法分别标记β-酪蛋白和β-乳球蛋白抗原，结果显示：过碘酸钠氧化法标记上述两种抗原的酶结合率、标记率、克分子比值合适。当β-CN-HRP反应体系中HRP与IgY的分子个数比为1：1时，标记效果最好（克分子比值0.11，结合率23.9％，标记率85.4％），而在β-Lg-HRP反应体系中，HRP与IgY的分子个数比为1.5：1时，标记效果最好（克分子比值0.05，结合率23.9％，标记率60.9％），所制得的酶标抗原的效价最高均可达1：640（酶标抗原起始浓度1mg/ml）。　　 建立了以β-酪蛋白为目标蛋白的竞争ELISA检测方法。确定了包被抗体最佳浓度（antl-β-CN IgY1：60）、封闭液及封闭时间（1％明胶的PBST，封闭1h）、酶标抗原（1：20）和待测牛乳样品（1：80）稀释液与抗体作用时间（60min）、底物最佳反应时间（20min，37℃）等对竞争ELISA效果有重要影响的因素，完成了检测抗原β-酪蛋白竞争ELISA法的优化，实验可在2小时内完成。　　 实验证明β-乳球蛋白与酶标抗原β-Lg-HRP无竞争抑制作用，为实现对β-乳球蛋白的定量测定采用间接ELISA法进行检测。确定间接ELISA的最佳工作浓度为：待测牛乳样品最佳包被浓度1：400，鸡抗牛β-Lg抗体IgY工作浓度1：160，酶标兔抗鸡IgG工作浓度1：2000。经交叉试验、敏感性试验、重复性试验证明本课题建立的两种ELISA最低检出量为5％，变异系数小于5％，具有灵敏、高效、快速的特点，可以应用于牛乳及其制品的质量检测。