【摘 要】
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小鹅瘟(Gosling Plague,GPa)是由细小病毒科、细小病毒属中的鹅细小病毒(Goose Parvovirus,GPV)引起的一种烈性传染病。该病毒主要使1月龄内雏鹅和雏番鸭发生的一种急性、高度接触
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小鹅瘟(Gosling Plague,GPa)是由细小病毒科、细小病毒属中的鹅细小病毒(Goose Parvovirus,GPV)引起的一种烈性传染病。该病毒主要使1月龄内雏鹅和雏番鸭发生的一种急性、高度接触性、败血性传染病,传染性强且死亡率高。危害与日龄密切相关,10日龄内雏鹅发病率和死亡率可达100%,在易感群中的致死率高达70%,以后发病随日龄增大而逐渐减少。但近几年有报道称该病的发病日龄有增大趋势,超过30日龄的占14.3%,这可能与鹅细小病毒毒力增强和基因变异有关。自1956年我国学者方定一首次发现并分离到病毒至今,国内外一直有分离到该病毒的报告,说明该病已经呈世界范围流行,对养鹅业的威胁极大。本试验旨在研究鹅细小病毒抗体的ELISA检测方法的建立,并初步应用于田间试验。小鹅瘟病毒一般不引起大鹅发病,可使大鹅呈现隐性感染,持续带毒、排毒,从而造成病毒的水平传播。小鹅瘟血清抗体的检测不但能监测鹅健康状态,而且也能检测疫苗免疫的抗体水平,特别是对隐性感染带毒的大鹅的检测,对减少大鹅体内毒株水平或垂直传播具有一定意义。到目前为止对小鹅瘟抗体的检测国内外报道的有琼脂扩散试验和中和试验,但是很多学者报道琼脂扩散试验灵敏度不高,并且需要高效价的抗血清及浓缩的尿囊液,而中和试验有操作繁琐、费时较长、费用大、实际应用中不易推广的缺点,为弥补上述两种检测小鹅瘟血清抗体的试验方法的不足,而建立间接ELISA方法来检测GPV的抗体,为疫苗免疫的抗体水平监测和流行病学调查提供一定的基础。本试验用鸭胚增殖鹅细小病毒,氯仿处理、差速离心、PEG沉淀、Sephrose-4B柱层析综合处理,提纯病毒抗原。用该抗原与购买的小鹅瘟弱毒活疫苗免疫健康成年鹅制备高免血清,作为ELISA试验的参考阳性血清,检测ELISA OD值大于1.0。参考阴性血清是从偏远的非疫区的农村采自不同日龄不同种的非免疫的50只20日龄左右的小鹅的血清,检测ELISA OD值小于0.3。检测ELISA OD值小于0.3。从鹅血清中提取IgG免疫家兔,制备兔抗鹅酶标抗体,测得效价为1:6400。摸索ELISA的反应条件并建立ELISA方法,确定小鹅瘟抗体临界值为OD190≧0.35,并初步应用于田间检测,测得100日龄以上的436只大鹅小鹅瘟抗体ELISA的阳性率为87.49%,而30日龄以内的239只小鹅阳性检出率为94.08%。通过本试验的研究,建立了间接ELISA方法,添补了国内的空白。该方法敏感,快速,操作简便,适合基层应用,也适合实验室诊断。
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