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目的研究丹参酮ⅡA磺酸钠(STS)对人增生性瘢痕成纤维细胞(HSFB)的增殖、超微结构、转化生长因子-β1(TGF-β1)与α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)合成和基因表达及自由基代谢平衡的影响,并探讨其作用机制。方法收集8例手术切除的烧伤创面愈合后的增生性瘢痕(HS)组织进行HSFB培养,取第3-6代细胞进行实验。按随机数字表法将细胞分为对照组和实验组,实验组设置不同浓度STS(0.05,0.075,0.10,0.125,0.15,0.20mg/ml)干预组,各组分别培养相应时间后检测相关指标,对照组加入等量不含STS的培养液。(1)干预培养24h,48h后,应用倒置相差显微镜和透射电镜观察各组细胞形态及超微结构改变;应用噻唑蓝法(MTT)检测细胞增殖抑制率(IR);(2)干预培养48h后应用蛋白质印迹法(Western blotting)检测各组TGF-β1和α-SMA蛋白合成情况;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法测定各组TGF-β1和α-SMA mRNA的表达(此两项指标实验组未设0.20mg/mL浓度组)。(3)各组分别于干预培养12h,24h,48h后,应用化学比色法检测细胞内丙二醛(MDA)含量、黄嘌呤氧化酶(XOD)活力、总超氧化物歧化酶(T-SOD)活力及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力变化。通过相应的图象分析系统和数据统计学方法进行结果分析。结果(1)对照组细胞生长良好,各实验组HSFB生长受到不同程度影响,光镜下见细胞出现贴壁减少,排列紊乱,细胞变小,变圆,胞内颗粒增多,细胞坏死等现象;透射电镜见细胞内线粒体肿胀及空泡样变性,粗面内质网扩张、囊泡变及脱颗粒,胶原纤维束减少,细胞坏死等现象。(2)实验组较对照组比较HSFB增殖受到明显抑制,随着STS浓度的升高和时间的延长,IR值同步增大,表现出时间-浓度效应;24h和48h时实验各组IR值分别为23.58%、32.11%、37.56%、57.98%、79.53%、96.69%和34.72%、38.48%、47.62%、64.40%、’89.70%、98.01%。(3)实验组中除0.05mg/mL组外,其余各组TGF-β1和α-SMA蛋白表达量均较对照组明显减少(F值分别为57.674、47.795,P<0.001);当药物浓度达0.15mg/mL时TGF-β1和α-SMA蛋白表达量降至最低。各实验组TGF-β1和α-SMAmRNA相对表达量与对照组相比均明显降低(F值分别为68.548、47.522,P<0.001);当药物浓度达0.15mg/mL时TGF-β1和α-SMA mRNA表达量下降最为显著。(4)与对照组比较,实验组MDA含量及XOD活力明显降低(P<0.05或P<0.01),且存在浓度效应。与对照组比较,实验组T-SOD和GSH-Px活力水平有不同程度升高,其升高程度受药物浓度和作用时间影响。与对照组比较,药物作用12h时,高浓度组(0.15mg/ml和0.20mg/ml) T-SOD活力水平升高明显(P<0.05);24h时,0.125-0.20mg/ml组显著升高(P<0.05或P<0.01);48h时,0.05mg/ml-0.10mg/ml组显著升高(P<0.05或P<0.01),0.15mg/ml和0.20mg/ml组显著降低(P<0.01)。与对照组比较,药物作用12h时,0.075~0.15mg/ml组GSH-Px活力水平明显升高(P<0.05或P<0.01),24h和48h时0.05mg/ml和0.075mg/ml组明显升高(P<0.01),48h时0.20mg/ml组GSH-Px活力水平明显降低(P<0.01)。结论(1)STS能够抑制HSFB增殖、减少TGF-β1和a-SMA蛋白合成,降低TGF-β1及a-SMAmRNA表达,其可能有利于抑制HS的形成和挛缩,成为治疗瘢痕的潜在药物。(2)STS可通过减少自由基产生及增强抗氧化酶活性调节HSFB自由基代谢平衡和生物学功能。