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雌性动物的剂量补偿效应是通过细胞中一条X染色体的转录失活来实现的。失活的染色体上面往往发生一系列的修饰,导致产生非常稳定的异染色质且能在细胞复制的过程中稳定遗传。X染色体失活与位于“X染色体失活中心”(XIC)上Xist基因息息相关,主要表现在Xist的转录产物通过包围一条X染色体使其沉默。由于其在X染色体失活中的重要作用,对Xist的研究一直是近几年的研究热点。其中很重要的一点就是试图建立Xist染色体在发育过程中的时空转录模式。但是由于胚胎发育早期Xist转录本数量的稀少而难以达到很好的效果。本实验采用巢氏RT-PCR方法,对来自体外培养的处于各个发育时期的小鼠胚胎进行了分析和性别鉴定。首先提取了6周龄昆明白小鼠几个组织的RNA,用普通反转录法扩增Xist和Sry以确定RT-PCR的条件,Sry的主要作用是用来做性别鉴定。最终将其反应条件确定为退火温度55℃,Sry和Xist可以置于同一体系中扩增。然后利用实验一确定的PCR条件,以Hprt为阳性对照,用巢式RT-PCR对小鼠早期胚胎进行Xist基因的转录分析,结果发现,转录Sry基因的睾丸组织以及雄性胚胎,从受精卵发育到囊胚的过程中,基本上不转录Xist基因;不转录Sry基因的雌性卵母细胞和雌性胚胎,从出现原核开始,到发育至2-细胞期的过程中,Xist基因一直不转录,但是,从4-细胞期开始,一直到孵化前囊胚阶段,雌性胚胎都转录Xist基因。实验结果说明,X染色体的失活最早出现在胚胎发育的4-细胞阶段。同时由于从原核时期扩增到了Sry,本文认为胚胎的性别鉴定取单个细胞即可。本论文不仅建立了Xist基因在小鼠胚胎早期发育过程中的转录模式,为解释X染色体的失活提供了理论依据,而且,也为体细胞克隆胚胎的重新编程和早期胚胎的发育提供了有益参考。