积雪草甙诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡及其机制的探讨

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目的:研究积雪草甙对体外培养的人宫颈癌Hela细胞的生长抑制和诱导凋亡的作用,并通过检测凋亡相关蛋白Survivin和Caspase-3来分析其凋亡的分子机制。 方法:应用MTT比色法观察积雪草甙对人宫颈癌Hela细胞生长的抑制作用,应用倒置显微镜和HE染色法观察药物作用后细胞形态结构改变。TUNEL法分析细胞凋亡情况。免疫组化SABC法检测Survivin和Caspase-3蛋白在积雪草甙诱导Hela细胞凋亡中的作用。 结果:积雪草甙可明显抑制宫颈癌Hela细胞的生长。MTT法显示浓度为3μmol/L、6μmol/L、12μmol/L、24μmol/L、48μmol/L和96μmol/L的积雪草甙分别作用6h、24h和48h后,细胞的抑制率分别随药物浓度的升高和时间的延长而升高,呈时间剂量依赖性。不同浓度积雪草甙作用后,倒置显微镜及HE染色法证实肿瘤细胞形态呈凋亡特征性改变。TUNEL法可检测到细胞内呈棕黄色颗粒的凋亡细胞。浓度为6μmol/L、12μmol/L、24μmol/L和48μmol/L的积雪草甙作用6h后,细胞凋亡率分别为(1.60±0.99)﹪、(2.07±0.16)﹪、(3.41±0.37)﹪和(5.70±0.28)﹪,作用24h后细胞凋亡率分别为(5.40±1.19)﹪、(14.68±1.41)﹪、(20.15±1.57)﹪和(31.01±1.38)﹪,作用48小时后凋亡率分别为(6.78±1.23)﹪、(21.77±1.64)﹪、(30.51±1.19)﹪和(38.77±1.28)﹪。积雪草甙作用Hela细胞6h-48h时,随着浓度增大,细胞凋亡率增大,相同浓度下48h细胞凋亡率高于24h和6h,即呈时间剂量依赖性。48μmol/L积雪草甙作用48h后免疫组化SABC检测Survivin蛋白表达率为(44.24±3.28)﹪与对照组(82.15±5.51)﹪相比有显著性差异(p<0.01)。Caspase-3蛋白表达率为(28.45±2.43)﹪与对照组(2.17±1.88)﹪相比有显著性差异(p<0.01)。 结论:积雪草甙对体外培养的人宫颈癌Hela细胞的生长有显著的抑制作用和诱导凋亡作用。
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