花椰菜是一种经济价值很高的蔬菜作物，原产地中海沿岸，十九世纪中叶传入我国，现已有很多地方品种和改良种，遗传资源丰富，而花椰菜的分子连锁图谱及相关分子生物学研究则相当贫乏，只有极少的文献做出相关报道。 本研究对花椰菜单染色体RFLP体系构建的一些相关方面进行了探索。（1）以4个花椰菜F₁的12个花药培养植株为材料，进行了花椰菜花药培养植株遗传多态性的研究，找到遗传多态性较高的5对亲本，为花椰菜分子连锁图谱群体的构建奠定了基础；（2）以福建地方品种“闽花60天”为材料，进行染色体的显微分离、体外扩增研究，为花椰菜单染色体RFLP体系构建做技术准备；（3）以分离到的花椰菜单染色体扩增产物为模板，进行花椰菜单染色体R基因同源克隆研究，为花椰菜单染色体RFLP的探针来源开辟了一条新途径，并得到5个抗性基因类似物（RGA），可以用作进一步的分子生物学研究。主要结果和结论如下： 1 RAPD技术分析花培植株的多态性 1) 以12个花培植株中两份材料（编号为AC07、AC10）基因组DNA为模板对53个RAPD引物进行了筛选，共有32个引物扩增出清晰可见的条带，其中有19个引物的扩增产物表现出多态性，多态性引物的比例为59.4％。 2) 以全部12个花药培养植株（编号为AC01-AC12）的基因组DNA为材料，用筛选出的19个引物对其进行扩增，选出扩增条带清晰的10个引物扩增结果（138条带），运用Dice法进行遗传相似系数的计算和分析，我们得到遗传多态性较高的5对亲本，依次为AC09与AC12，AC08与AC12，AC07与AC12，AC04与AC09，AC04与AC07。 3) 将10个引物所扩增的138条条带进行聚类分析，分析表明，该12个花椰菜花培植株可以划分为三组，第一组包括AC01，AC02，AC03，AC04，AC10，AC11，AC12；第二组包括AC05，AC06，AC07，AC08；第三组只有AC09。其中第一组又可分为两个亚组：AC01，AC02，AC03，AC04为一亚组；AC10，AC11，AC12为另一亚组。聚类分析结果与田间杂交配组和所取的单株花药培养情况完全一致。 2 花椰菜单染色体的显微分离和体外扩增 1) 以“闽花60天”种子根尖为材料，经酶解低渗法制片，用微细玻璃针法总共分离到40多条花椰菜单染色体。 2) 以分离的花椰菜单染色体为材料，用两种扩增方法（LA-PCR和DOP-PCR）成功地对花椰菜单染色体进行了体外扩增。其中，采用LA-PCR方法获得的扩增片段 花椰菜单染色体RFLP体系的构建2较大，且污染控制相对容易。 3)分别以基因组DNA和任一条单染色体的扩增产物为探针，应用southem一blotting杂交，证明了扩增产物确实来源于基因组。3单染色体NBS一LRR类R基因同源序列的克隆和分析 l)选用两对根据R基因保守结构域设计的简并特异引物（X3亿:和Y:扩LP.:），对花椰菜基因组DNA进行了扩增，其中X3/z:能扩出soobP左右的日标条带。对其克隆、酶切归类，共得到12类RGA。选取一个克隆hsol进行测序，同源检索表明为RGA，说明X3亿:引物组合对扩增花椰菜RGA是有效的。 2)选用引物组合X3/Z:对花椰菜的一条染色体扩增产物进行了RGA扩增、克隆、酶切归类，发现从该染色体克隆到的RGA可以分成7类，对7个克隆（hs02，hso3，hso4，hs05，hs06，hso7，hsos）测序后，得到5个克隆测序结果（hsoZ，hso3，hsos，hs06，hS08）。 3)对克隆到的6个序列进行Blast分析发现，从基因组DNA中克隆到的hsol为RGA，从单染色体扩增产物中克隆到的hs05不是RGA，其余4个（hs02，hs03，hs06，heOS）均为RGA，它们与已克隆的油菜、甘蓝、拟南芥的RGA具有很高的同源性。 4)以上述5个RGA序列与6个已知的R基因序列应用MegAlign软件进行比较分析发现，本研究获得的5个序列与己知植物R基因相应序列的一致性分布范围为11.4%一64%，其中序列hs08与尺尸害J和尺尸乙I的同源性最高，一致性分别高达64%、61.1%。聚类分析表明，它们分为两大类:heOI，hs02和hs03与已知基因N，五乙天尸尸1，L石聚为一类;hs06和hs08与已知基因尺尸乙了和天尸sj为一类。