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CD4分子是T辅助细胞表面特异性标记,在T细胞活化过程中发挥粘附及信号转导的作用,具有重要的免疫学功能。但CD4分子也与许多自身免疫性疾病有关。大量研究证明抗人CD4单克隆抗体治疗很多与CD4相关的自身免疫性疾病具有很好的疗效。WuT4是武汉生物制品研究所自行研制的鼠源性抗人CD4单克隆抗体。相关临床研究表明,该抗体能封闭人CD4分子,具有很好的临床效果。但由于WuT4是鼠源性抗体,且识别的表位不明确,限制了其在临床方面的广泛应用。
本文拟用噬菌体肽库技术筛选WuT4单抗识别的人CD4抗原表位,为WuT4与CD4分子相互作用及WuT4人源化研究提供依据。用抗人CD4的单克隆抗体(WuT4)作为筛选分子,对噬菌体随机7肽库进行亲和筛选。经过四轮筛选,随机挑取10个噬菌体克隆,经ELISA鉴定9个为阳性克隆。测序分析这9个克隆展示同一外源肽序列:LPLSWHR。该序列与人CD4分子同源性比较发现有42.8%的同源性。将化学合成的表位肽与KLH载体蛋白偶联后免疫小鼠,ELISA结果显示免疫小鼠血清与未偶联的表位肽产生阳性反应,表明偶联后的表位肽具有较好的免疫原性。免疫荧光实验和流式细胞仪检测表明免疫血清能与部分人PBMC结合,但是否与CD4分子特异性结合还需进一步验证。
本研究为WuT4单抗与人CD4分子相互作用及WuT4单抗人源化研究提供了依据。同时,也为肽苗的研制打下一定基础。