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第一部分研究背景和目的：本研究旨在筛选和验证丙型肝炎干扰素抗病毒疗效预测microRNA血清标志物。肝脏特异性表达的microRNA-122近年来被认为是急性肝损伤的早期、灵敏血清标志物。由于血清/血浆microRNA检测尚无公认稳定内参,内参和检测方法的选择导致诸多循环microRNA研究结果存在偏差。本研究拟建立血清microRNA-122绝对定量检测体系,评价急性肝炎和慢性丙型肝炎患者血清microRNA-122水平与血清ALT的相关性及在慢性丙型肝炎患者中与HCV病毒载量和肝组织炎症活动程度的相关性。同时,基于血清microRNA芯片实验,筛选能够预测丙型肝炎患者治疗病毒学应答的血清mciroRNA候选分子。方法：采集未接受抗病毒治疗慢性丙型肝炎患者血清105例、急性肝炎患者治疗过程系列血清11例和健康体检者血清33例,均已签署知情同意书。基于化学合成microRNA-122和外源参照cel-mir-39化学合成标准品绘制标准曲线,校正样品提取效率并对血清microRNA-122进行绝对定量检测。慢性丙型肝炎患者HCV病毒载量采用Abbott REALTIME(?)试剂检测,肝组织炎症坏死分级采用Ishak评分系统进行评价。分别富集慢性丙型肝炎干扰素治疗应答组26例患者和无应答组13例患者基线和治疗第4周血清,行microRNA芯片实验,筛选两组患者基线和早期血清差异microRNA,在个体样本和扩大样本中验证。结果：血清microRNA-122水平在急性肝炎患者高于慢性丙型肝炎患者,慢性丙型肝炎患者高于健康体检人群,差异均具有显著性(p<0.001,p<0.001)。急性肝炎患者治疗前血清microRNA-122水平与血清ALT水平呈现显著相关性(r=0.8462,p<0.001),但在治疗过程中血清microRNA-122水平保持较高水平,与ALT的降低不具有相关性(r=0.2748,p=0.1938)。慢性丙型肝炎患者血清microRNA-122水平与HCV病毒载量(r=-0.01734,p=0.8607)、血清ALT(r=0.07135,p= 0.4695)以及肝组织炎症坏死分级(r=0.08263,p=0.4021)均无显著相关性。microRNA芯片实验筛选得到microRNA-221和microRNA-603在SVR组和non-SVR组基线和第4周均存在显著差异(p值均小于0.01)。其中,microRNA-221在SVR组基线至第4周显著上调,而在non-SVR组基线至第4周显著下调；microRNA-603在SVR组基线至第4周显著下调(p<0.01),而在non-SVR组基线至第4周无显著变化(p>0.05)。结论：血清microRNA绝对定量体系的建立可避免由于提取效率及内参不稳定导致的偏差,提高结果准确性。尽管血清microRNA-122这一急性肝损伤标志物与急性肝炎患者治疗前血清ALT呈现良好的相关性,但其动态水平无法有效指示治疗效果；在慢性丙型肝炎进展过程中也并不能反映患者肝组织炎症坏死程度和病毒复制水平。血清MicroRNA-221和microRNA-603作为丙型肝炎抗病毒疗效预测候选标志物,在SVR患者和non-SVR患者基线水平存在显著差异。第二部分研究背景和目的：HCV基因1型慢性感染者对干扰素治疗应答较差,但其具体机制未知。IP-10血清水平被认为可能与慢性丙型肝炎患者抗病毒治疗疗效相关,目前尚无中国人群报道。本研究通过筛选基因1型和2型HCV复制子细胞干扰素处理前后的差异表达基因,寻找HCV基因1型拮抗干扰素的相关基因。检测IP-10血清水平在基因1型和2型丙型肝炎患者中的差异,评价其单独及联合其他指标对抗病毒治疗持续病毒学应答(SVR)的预测价值。方法：构建基因1型和2型HCV复制子细胞模型,芯片实验筛选二者干扰素处理前后的差异表达基因并行实时定量PCR验证。血清IP-10采用ELISA法测定。对于丙型肝炎抗病毒治疗SVR预测因素的筛选,首先经过单因素分析,随后p<0.10的变量纳入多因素Logistic回归分析筛选独立预测变量。结果：IP-10和GBP1在基因1型和基因2型HCV复制子细胞模型基线和干扰素处理后水平存在显著差异,且基因1型复制子细胞细胞上清IP-10水平显著高于2型；P-10血清水平在基因1型丙型肝炎患者中也显著高于2型。IP-10基线血清水平与ALT显著相关,但与IL28B基因型和病毒载量无关。IP-10基线和治疗第4周的血清水平能够有效预测丙型肝炎抗病毒治疗SVR；IP-10血清水平与IL28B基因型或快速病毒学应答(RVR)联合应用,能够显著提高对SVR的预测性能,阳性预测值分别可以达到96.15%和95.24%,阴性预测值分别为50%和50%。结论：HCV基因1型患者IP-10基线血清水平显著高于2型患者,其可能参与干扰素拮抗的分子机制;P-10作为SVR的独立预测指标,其与IL28B基因型和RVR的联用,均能显著提高SVR预测的准确性。