p53表达下调对saRNA介导p21基因激活的影响研究

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目的:研究下调肾癌ACHN细胞和膀胱癌5637细胞中p53的表达对saRNA激活p21基因的影响。方法:人工合成与p21基因启动子区域特定序列(针对启动子区的-322位点)对应的saRNA分子dsP21-322,与p53基因的mRNA特定序列对应的siRNA分子dsP53,以及相同长度与人体已知RNA序列无同源性且并荧光标记的阴性对照小分子双链RNA(dsRNA)分子dsCon;将肾癌ACHN细胞(p53野生型)和膀胱癌5637细胞(p53突变型)分别分为5组:①空白组;②阴性对照组;③dsP21-322单转染组;④dsP53单转染组;⑤dsP21-322与dsP53共转染组。运用脂质体转染的方法将上述dsRNA分子转染到两种肿瘤细胞中,通过荧光染色检测转染效率,采用Realtime-PCR和Western-blot的技术检测各组细胞中p53和p21转录和翻译水平上的表达差异。结果:①在单转染组中,dsP21-322能够激活肾癌ACHN细胞、膀胱癌5637细胞中p21基因,两个细胞株中的p21基因表达均上调;②dsP53能够沉默肾癌ACHN细胞,膀胱癌5637细胞中p53基因,两种细胞株中的p53基因表达均下调;③在共转染组中肾癌ACHN细胞,膀胱癌5637细胞中p53基因下调,而p21基因的表达上调。在p53基因被沉默的情况下,dsP21-322依然能够激活p21基因。结论:外源合成的saRNA分子dsP21-322能激活肾癌ACHN细胞(p53野生型)和膀胱癌5637细胞(p53突变型)的p21基因表达;当p53基因下调时,无论p53基因是野生型还是突变型,均不影响dsP21-322激活p21基因。
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