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果实硬度是关系到口感和果实保鲜期的一个重要指标,与果实抵抗机械损伤、裂果、真菌侵染密切相关。果实软化是果胶物质降解和细胞分离的结果,多聚半乳糖醛酸酶(PGs)与果实软化密切相关。该酶是一种细胞壁蛋白,在细胞壁结构的改变中起重要作用,催化果胶分子中α- (1、4)-多聚半乳糖醛酸的裂解,从而参与果胶的降解,促进果实软化。1-MCP是近几年来新发现的乙烯作用抑制剂,它能够竞争结合乙烯受体蛋白,阻碍该受体与乙烯的结合,从而具有抑制或延缓植物生理老化的作用,已经在切花保鲜中广泛应用,近来也应用到了果品保鲜中。本研究运用改良的CTAB方法提取RNA,经过RT-PCR克隆得到PG基因,以1-MCP为乙烯抑制剂,使用Northern杂交法分析冷藏苹果果实硬度变化、乙烯释放、呼吸强度与PG基因表达之间的联系,并构建反义表达载体转化烟草。主要结果如下:1.采用改良的CTAB-LiCl法从苹果果皮中提取到高质量的RNA。2.利用RT-PCR方法,从苹果果皮中克隆到PG酶基因。3.使用Northern杂交法研究了PG基因表达、乙烯、呼吸强度与果实硬度之间的关系。结果表明:在当使用1-MCP抑制乙烯释放时,PG基因的表达完全被抑制,而对照果实随着储藏时间的延长,PG表达量不断增加;1-MCP(0.5μmol/L)对果实乙烯的释放起到了良好的抑制作用,而对照组果实随储藏时间的延长,乙烯释放不断增强;1-MCP明显降低了果实的软化过程,13天内硬度仅下降了8.7%,明显低于对照组的51%;1-MCP对呼吸强度也有明显的抑制作用。实验证实,PG是青香蕉苹果果实硬度的一个调控酶,受乙烯的诱导,随着硬度的下降,它的表达量不断增加。4.构建了pBI-PG反义表达载体,并转化烟草,得到了转PG基因烟草,为进一步研究该基因功能和转化苹果打下基础。