拮抗链霉菌Men-myco-93-63分类学鉴定及其几丁质酶基因研究

来源 :河北农业大学 | 被引量 : 14次 | 上传用户:fei061101
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形态特征、培养特征及生理生化特征分析发现,棉花黄萎病拮抗链霉菌Men-myco-93-63孢子丝呈螺旋形,孢子椭圆形,孢子表面结构光滑。在九种不同培养基生长良好,其基生菌丝及气生菌丝颜色分别为淡黄色和淡白色,在部分培养基上培养可产生象牙黄或豆汁黄可溶性色素。链霉菌Men-myco-93-63可在15℃~37℃环境下生长,环境温度为45℃时生长停滞。其存活pH值为pH5~pH12;明胶液化;牛奶凝固;淀粉水解强,可利用纤维素;不产生H2S和黑色素,不还原硝酸盐;利用葡萄糖、麦芽糖、甘油、木糖、果糖、蔗糖、肌醇、阿拉伯糖、鼠李糖,不利用棉子糖、甘露醇、醋酸钠。 链霉菌Men-myco-93-63与玫瑰黄链霉菌(Streptomyces roseoflavus)的形态特征及培养特征一致。二者的16S rDNA序列相似性达到了99.93%。并且二者的16S rDNA序列中的120bp γ可变区序列完全相同。因此,根据链霉菌多相分类原则,将链霉菌Men-myco-93-63定名为玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63(Streptomyces roseoflavus Men-myco-93-63)。 从GeneBank检索到39个克隆自链霉菌的几丁质酶基因,利用Clustal V程序对其进行基因多序列排列,根据相似性大致分成3群,并根据B群和C群基因序列的保守区域设计PCR引物,对河北农业大学植物病害生物防治研究室筛选并保存的5株对棉花黄萎病菌具有抑制作用的链霉菌进行了分子探测,发现这5株链霉菌普遍存在第19族几丁质酶基因和与Streptomyces lividans chiC相似的第18族几丁质酶基因。Streptomyces roseoflavus Men-myco-93-63的PCR扩增产物分别命名为chi 19-1和chiC。序列分析表明,它们分别与Streptomyces griseus HUT6037 chiC(属第19族几丁质酶)和Streptomyces lividans chiC(属第18族几丁质酶)的催化域序列高度同源,前者为85.42%,后者为92.02%。 以大肠杆菌-链霉菌穿梭柯斯质粒pKC505为克隆载体,构建了玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63在大肠杆菌LE392的基因文库。3168个转化子构成的文库覆盖率达到了99.93%,插入外源DNA片段大小为20~30kb。利用chiC基因片段为探针,从基因文库筛选到5个阳性克隆。表明所构建的基因文库比较完整,可以用于玫瑰 摘 要黄链霉菌Men-myco-93-633抗生素生物合成基因的克隆。 利用染色体步移法测定了Smptompes rose咖us chiC基因 1179hp片段序列,该序列包含了典型的第 18族几丁质酶基因的活性位点序列orosite数据库,编号:PSOI 095X并且包含了与蛋白质结构域数据库(Pfam)中第 18族糖基水解酶(编号:PF00704)基因相似的完整序列。表明该片段包含了Sm甲冰叹W。删edens chiC的整个催化域序列,该序列编码 354个氨基酸残基,与 Sptompes coelicolor chiD催化域在核昔酸水平的的同源性为82.8%,在氨基酸水平的同源性为83.3%。
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