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天然产物是普遍存在于动、植物及微生物体内的特殊物质,是药物发现的重要来源。目前,从传统分离源中获得具有新颖结构活性天然产物的概率不断降低,而特殊环境来源生物的探索引起了药物学家的关注。从昆虫共生真菌次生代谢产物中发现具有生物活性的新天然产物是共生菌资源研究的重要方向之一。昆虫共生菌已经成为发现新化合物和新型生物活性物质最具潜力的类群,是开发新型药物的研究热点之一。本研究以健康的鞘翅目瓢虫科昆虫-异色瓢虫（Harmonia axyridis）为研究对象,对其体内的共生真菌进行分离和鉴定。将分离得到的共生真菌进行大米固体发酵培养,对其发酵产物化学成分进行分离和鉴定,对部分结构新颖化合物的细胞毒活性进行研究。1、对异色瓢虫体内共生真菌进行分离,利用GenBank中参考序列的相似性及系统发育地位,并结合形态学对分离得到的共生真菌进行鉴定。从异色瓢虫体内分离出4种共生真菌,分别是镰刀菌属真菌Fusarium equiseti,毛球腔菌属真菌Setosphaeria rostrata,链格孢属真菌Alternaria alternate和突脐蠕孢属真菌Exserohilum mcginnisii。2、对4种共生真菌进行大米固体发酵,通过硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶色谱、ODS反相柱色谱、制备硅胶薄层层析、高效液相色谱以及重结晶等方法进行分离和纯化,再通过核磁、高分辨质谱、ECD计算和单晶衍射等方法进行结构解析。从4种异色瓢虫共生真菌大米发酵产物中共分离并鉴定了63个化合物,其中9个新化合物（化合物1、5、6、16、17、21、39、61和62）和1个新天然产物（化合物41）。3、采用MTT法对分离得到的部分化合物（化合物1、2、21、22、27和30）进行细胞毒活性测试,其中化合物2对4种人肿瘤细胞人乳腺癌细胞（MCF-7）、人胃癌细胞（MGC-803）、人宫颈癌细胞株（Hela）和人肝癌细胞（Huh-7）均有较好的抑制活性。化合物2对4种肿瘤细胞的IC50值为21.00、2.37、46.53和13.10μg/mL(对照组顺铂对4种肿瘤细胞的IC50值分别为2.05、3.47、5.13和8.27μg/mL)。化合物2对MGC-803细胞的增殖抑制作用强于顺铂,具有进一步研究开发的价值。4、迁移与穿梭试验结果表明,在48 h,化合物2浓度为3和6μg/mL时,MGC-803细胞的迁移率与对照组相比显著降低（P<0.01）;在24 h,化合物2浓度为12.5、25和50μg/mL时,MCF-7细胞的迁移率与对照组相比显著降低（P<0.01）;在24 h,化合物2浓度为10和20μg/mL时,Huh-7细胞的迁移率与对照组相比降低（P<0.05）。在24 h,化合物2浓度为1.5、3和6μg/mL时,MGC-803细胞的穿膜细胞数与对照组相比显著减少（P<0.01）;在48 h,化合物2浓度为3和6μg/mL时,MGC-803细胞的穿膜细胞数与对照组相比仍有显著减少（P<0.01）;在48 h,化合物2浓度为6.25、12.5和25μg/mL时,MCF-7的穿膜细胞数与对照组相比显著减少（P<0.01）。5、DAPI染色结果表明,在24 h,化合物2浓度为1.5、3和6μg/mL时,MGC-803细胞均出现了凋亡小体;在24 h,化合物2浓度为12.5、25和50μg/mL时,MCF-7细胞也均出现了凋亡小体。初步判断化合物2能够诱导MGC-803细胞和MCF-7细胞凋亡。6、流式细胞仪进行凋亡和周期试验结果表明,化合物2浓度为3和6μg/mL时,MGC-803细胞的总凋亡率分别为24.15和42.47%;浓度为12.5、25和50μg/mL时,MCF-7细胞的总凋亡率分别为43.14、52.99和53.76%。化合物2浓度为1.5μg/mL时,MGC-803细胞的周期阻滞在G1期;浓度为3和6μg/mL时,MGC-803细胞的周期阻滞在S期;浓度为12.5、25和50μg/mL时,MCF-7细胞的周期阻滞在S期。Western blot结果显示,化合物2是通过线粒体膜上Bcl-2家族触发线粒体介导内源性凋亡通路（上调Bax蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达）诱导MGC-803细胞凋亡。7、RT-CA检测结果表明,浓度为1.5μg/mL的化合物2对MGC-803细胞具有抗有丝分裂的作用;浓度为3和6μg/mL时,对MGC-803细胞具有DNA损伤的作用;化合物2浓度为12.5、25和50μg/mL时,对MCF-7细胞具有DNA损伤的作用;浓度为2.5、5和10μg/mL时,对Huh-7细胞具有细胞骨架抑制作用。本研究从4种异色瓢虫共生真菌次生代谢产物中共分离得到9个新化合物,其中化合物1为具有8个手性中心的[6/6/5/5]四环系统的聚酮碳骨架新化合物,化合物62是一个稳定的烯醇式结构新化合物。化合物2通过上调Bax蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达诱导MGC-803细胞凋亡,从而抑制细胞增殖。同时,化合物2兼有抗有丝分裂,DNA损伤和细胞骨架抑制作用,具有开发成抗肿瘤药物的潜力。