【摘 要】
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猪的脂肪沉积与瘦肉率密切相关。Ⅲ型纤连蛋白组件包含蛋白5（Fibronectin typeⅢdomain-containing protein 5,FNDC5）在脂肪沉积方面具有重要作用,它通过剪切形成鸢尾素（Irisn）,促进皮下脂肪组织产热,燃烧脂肪。FNDC5对脂肪沉积的作用机制仍不清楚。本试验探究FNDC5对脂肪细胞成脂分化的调控作用,为FNDC5的功能研究提供基础数据。本试验通过PCR扩
【基金项目】
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三晋学者支持计划专项经费资助（2016, 2017）； “山西省 1331 工程”资助（2017）； 山西省应用基础研究面上青年基金项目（201901D211376,201901D211369）； 山西优势肉用家畜高效安全生产协同创新中心建设项目；
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猪的脂肪沉积与瘦肉率密切相关。Ⅲ型纤连蛋白组件包含蛋白5（Fibronectin typeⅢdomain-containing protein 5,FNDC5）在脂肪沉积方面具有重要作用,它通过剪切形成鸢尾素（Irisn）,促进皮下脂肪组织产热,燃烧脂肪。FNDC5对脂肪沉积的作用机制仍不清楚。本试验探究FNDC5对脂肪细胞成脂分化的调控作用,为FNDC5的功能研究提供基础数据。本试验通过PCR扩增获得马身猪FNDC5基因的CDS序列,通过生物信息学分析了FNDC5的基本结构;q RT-PCR和Western blotting实验分析了马身猪FNDC5的表达模式,检测了马身猪和大白猪皮下脂肪组织FNDC5的表达量;构建FNDC5过表达和干扰载体,经过慢病毒包被,分别转染C3H10T1/2细胞和猪原代前体脂肪细胞,采用q RT-PCR检测分化关键基因的表达量,油红O染色检测脂滴含量,Western blotting检测细胞外信号调节激酶（extracellular regulated kinase1/2,ERK1/2）及磷酸化ERK1/2的表达水平。其试验结果如下:1.成功获得了猪FNDC5基因CDS区,全长843 bp,编码280个氨基酸。FNDC5在马身猪腹部脂肪中的表达量高于背部皮下脂肪。马身猪皮下脂肪中FNDC5的表达量显著高于大白猪。2.C3H10T1/2细胞中过表达FNDC5,成脂分化关键基因过氧化物酶体增殖物激活受体-γ（peroxisome proliferator-activated receptor-γ,PPARγ）、脂肪酸结合蛋白4（fatty acid binding protein 4,FABP4）和CCAAT增强子结合蛋白α（CCAAT enhancer binding protein alpha,C/EBPα）的表达量极显著降低（P＜0.01）,CCAAT增强子结合蛋白β（CCAAT enhancer binding protein beta,C/EBPβ）表达量显著降低（P＜0.05）,脂滴含量明显减少,P-ERK1/2的含量显著降低（P＜0.05）。C3H10T1/2细胞中干扰FNDC5,成脂分化关键基因PPARγ、C/EBPβ、FABP4和C/EBPα的表达量极显著上调（P＜0.01）,脂滴含量明显增加,P-ERK1/2的含量显著升高（P＜0.05）。3.猪原代前体脂肪细胞中过表达FNDC5,PPARγ、FABP4和C/EBPα的表达量极显著上调（P＜0.01）,C/EBPβ表达量显著上调（P＜0.05）,脂滴含量明显增加,P-ERK1/2的含量无明显变化。猪原代前体脂肪细胞中干扰FNDC5,成脂分化关键基因PPARγ、C/EBPβ、FABP4和C/EBPα的表达量显著降低（P＜0.05）,脂滴含量明显减少,P-ERK1/2的含量没有变化。综上所述,本试验成功克隆了猪FNDC5基因的CDS序列,马身猪皮下脂肪中FNDC5的表达量明显高于大白猪。FNDC5对C3H10T1/2细胞和猪原代前体脂肪细胞成脂分化的调控作用并不一致,FNDC5可以抑制C3H10T1/2细胞成脂分化,但促进猪原代前体脂肪细胞成脂分化。初步探究了FNDC5调控脂肪沉积的作用及机制,本试验结果为研究FNDC5调控脂肪发育的功能提供了理论依据。
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