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细胞壁是植物积极防御外来病原体入侵的结构屏障,在植物受到创伤和感染时,能积极参与防御反应。植物受到创伤时,自身的一些水解酶可以降解细胞壁的组分,诱导防御反应的发生及伤口的愈合。本文以大豆品种“吴江青豆”为材料,对大豆受到机械伤害后β—甘露聚糖酶在基因水平、蛋白质水平及酶活性水平的表达模式进行了研究,并通过对未受到机械伤害的大豆植株外源施加茉莉酸甲酯,研究MeJA对β—甘露聚糖酶的调控作用。结果如下:
⑴大豆在第一片三出复叶的中间小叶受机械伤害后的4h时,中间小叶及两侧小叶就出现了内源MeJA的迅速增加,但处理8h以前都没有出现MeJA生物合成的关键酶LOX活性的升高。大豆茎尖伤害后4h时,茎部位及第一片三出复叶中内源MeJA增加,但第二片三出复叶中MeJA水平无显著变化。对大豆第一片三出复叶的中间小叶喷施MeJA,迅速引起了中间小叶及两侧小叶内源MeJA的累积,其中50μM MeJA处理要高于30μM MeJA处理,但处理8h以前都没有出现LOX活性升高。大豆根部浸施MeJA也促进了第一片三出复叶、第二片三出复叶和茎部位内源MeJA的升高,并且在处理后4h时就上升到最大值。但与叶片喷施MeJA处理相比,根部浸施引起的内源MeJA含量的增加却小得多。
⑵在未受机械伤害的大豆植株中,无β—甘露聚糖酶基因GmManl的表达;第一片三出复叶的中间小叶受机械伤害后,中间小叶1h时即出现低水平的GmManl表达,而两侧小叶在2h出现低水平的GmManl表达,并随着处理时间的延长,表达量越来越高。茎尖伤害后1 h时,在第一片三出复叶中出现GmManl的表达,直到伤害后48 h,表达都呈上升趋势;在茎部位只有比较低水平的GmManl的表达;第二片三出复叶中无GmManl的表达。对第一片三出复叶的中间小叶喷施MeJA后1h,中间小叶及两侧小叶中的GmManl表达量迅速上升到最高峰,直到处理后期48 h,都维持在此高水平,且30μM和50μM的MeJA处理无浓度上的效应。根部浸施MeJA后1 h,第一片三出复叶中的GmManl表达量就上升到最高峰,但明显低于叶片喷施MeJA的诱导效应,且30μM和50μM的MeJA处理也无浓度上的效应。根部浸施MeJA后茎部位只有较低水平的GmManl表达,而第二片三出复叶在处理过程中无GmManl的表达。
⑶蛋白水平上,未受到机械伤害的大豆植株中无endo-β—甘露聚糖酶基因GmManl编码的蛋白质的表达。对第一片三出复叶的中间小叶进行机械伤害后1h,中间小叶和两侧小叶出现低水平GmManl编码蛋白质的表达,之后表达量开始上升,其中,中间小叶在受机械伤害后24 h时,GmManl编码蛋白质的表达下降,而两侧小叶则一直维持较高水平。茎尖伤害后1h时,第一片三出复叶出现低水平的GmManl编码蛋白质的表达,之后表达量开始上升,到处理后48 h都保持在较高的表达水平。机械伤害对GmManl编码蛋白质的诱导效应同样可以用外施MeJA来达到,对第一片三出复叶的中间小叶喷施30μM和50μM的MeJA后1h时,中间小叶及两侧小叶就出现GmManl编码蛋白质较高水平的表达,并维持在此水平到处理后48 h,30μM和50μM MeJA处理无明显的浓度效应。根部浸施MeJA只诱导了第一片三出复叶中GmManl编码蛋白质的表达,但对第二片三出复叶及茎无此诱导效应。
⑷酶活性水平上,未受到机械伤害的大豆植株中就有一定的β—甘露聚糖酶活性。大豆第一片三出复叶中间受到机械伤害后,引起了中间小叶及两侧小叶酶活性的增加。茎尖伤害后主要引起了第一片三出复叶中β—甘露聚糖酶活性的升高,茎部位及第二片三出复叶中的β—甘露聚糖酶活性在处理前后无显著变化。机械伤害对β—甘露聚糖酶活性的诱导效应也可以通过外施MeJA来实现。在大豆植株未受到机械伤害的前提下,发现对第一片三出复叶的中间小叶喷施30μM和50μM的MeJA可以引起中间小叶及两侧小叶β—甘露聚糖酶活性的上升,且50μM MeJA处理高于30μM MeJA。大豆根部浸施30μM和50μM的MeJA主要引起了第一片三出复叶中β—甘露聚糖酶活性的上升,但对第二片三出复叶及茎中的β—甘露聚糖酶活性影响不大。