不管是在真核生物还是原核生物中，分泌蛋白正确二硫键的形成是非常重要的。正确的二硫键可以稳定蛋白质的空间结构，错误的二硫键导致蛋白质不稳定，进而导致蛋白质聚集或被降解。DsbC是一种二硫键异构酶，在细胞内它能帮助纠正错误配对的二硫键，使蛋白质正确折叠。那么DsbC对于含有多对二硫键的蛋白质在体外折叠时是否起作用呢?本文利用基因工程手段，获得了重组折叠酶DsbC。经过纯化复性后，最终制备了纯度大于95％的DsbC。以含有5对二硫键的植酸酶为研究对象，研究了植酸酶变性后其复性过程中，添加DsbC和其它复性因子对植酸酶复性过程酶活性的影响。主要研究结果如下：　　 1.DsbC蛋白的克隆表达、纯化与复性　　 将dsbC基因克隆并连接到原核表达载体pET-30a上，转入大肠杆菌中进行原核表达。原核表达载体pET-30a表达的DsbC主要以包涵体形式存在，将包涵体充分洗涤后，经过亲和层析，得到纯度较高的DsbC蛋白包涵体；将DsbC蛋白变性后用透析法去除变性剂，得到了有活性的DsbC蛋白。　　 2.DsbC蛋白对植酸酶复性的帮助作用　　 DsbC对尿变性的植酸酶复性过程中植酸酶的正确折叠有促进作用。在尿变性过程中若不添加还原剂，植酸酶的自我复性活力可达45％，DsbC蛋白的添加能够提高约30％的复性率，达到原来酶活力75％左右：在尿变性的同时添加还原剂，破坏二硫键，使植酸酶完全变性，植酸酶的复性仅有7％，DsbC蛋白的添加能够使植酸酶的复性率提高5倍。说明DsbC蛋白能促进植酸酶的复性。　　 3.DsbC蛋白的异构酶功能与分子伴侣功能　　 从DsbC帮助植酸酶复性的结果看，DsbC可能既有分子伴侣作用又有异构酶的作用。为了区分这两种作用，利用碘乙酰胺作为巯基修饰试剂，共价修饰去除DsbC蛋白的巯基，使其丧失异构酶活性，进一步研究了在还原尿变性植酸酶的复性过程中，同时添加DsbC蛋白和修饰的DsbC蛋白（mDsbC）的作用，发现DsbC蛋白的添加能够提高约30％的复性率，mDsbC蛋白的添加仅能够提高约9％的复性率。说明DsbC蛋白在蛋白质的再折叠过程中既有二硫键异构酶作用又有分子伴侣功能，且以异构酶功能为主。　　 4.DsbC蛋白与一些辅助因子在植酸酶再折叠过程中的作用　　 DsbC的作用与体系内氧化还原状态有关。不同的GSH/GSSG比例影响植酸酶的复性率。Osmolytes在蛋白质折叠过程中可以起到稳定蛋白质结构、诱导正确构象的作用，对不同浓度、不同种类osmolytes在还原尿变性植酸酶复性过程所其的作用也有差别，甘油、二甲基亚砜、脯氨酸均能在一定程度上提高植酸酶的复性率。复性液中添加DsbC的同时添加osmolytes，使复性率又有进一步提高。说明在蛋白质的再折叠过程中DsbC和osmolyte对酶的复性起协同作用。