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以获得的根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的泡桐转基因再生植株为基础,对外源Shiva-Ⅰ基因在其后代中的表达和遗传,转基因泡桐和未转基因泡桐在苗期和成株期的株高及表型进行了分析研究。 以三个独立转基因系泡桐的母本R0代,无性根繁R1代,自交F1代及测交F2代为研究对象,利用PCR,分子杂交和RT-PCR技术检测和分析了Shiva-Ⅰ基因的表达及遗传。结果表明:随机抽样的R0代群体中8株及R1代群体中7株植株都检测到Shiva-Ⅰ基因;检测的F1代群体中,L6、L11和L15株系Shiva-Ⅰ基因的分离比例分别为2.38:1、2.0:1和3.2:1,经X2测验分析,结果与孟德尔遗传的分离比例3:1相符;检测的L6株系F2代群体中Shiva-Ⅰ基因的分离比例为0.82:1,经X2测验分析,结果也符合孟德尔遗传的分离比例1:1。随机选取样品进行分子杂交与RT-PCR分析,结果PCR呈阳性反应的分别有信号和目的DNA带的产生,而PCR呈阴性反应的则没有产生,从而进一步确证了PCR的结果。以上结果初步表明,外源Shiva-Ⅰ基因在母本和无性根繁后代中得到了表达,并且在有性后代F1和F2中的分离和遗传符合孟德尔遗传规律。 对成株期泡桐的株高和表型进行研究的结果表明:成株转基因泡桐与未转基因泡桐的株高在生长前期未表现出明显差异,而生长后期表现出一定的差异,且随着时间的推移,差异具有增加的趋势,成株期转基因泡桐的生长速度比未转基因泡桐较慢。对转基因和未转基因泡桐植株表型的观察,发现转基因泡桐母本中少数植株当年就开花结籽。 对泡桐苗期的株高和表型进行的研究结果表明:三个转基因系泡桐F1代在生长速度方面表现出一定的差异,L15株系植株的平均生长速度比L6和L11株系快。但同一时期,三个转基因系泡桐之间的平均株高差别不大。与对照未转基因泡桐相比,三个转基因系泡桐的株高均明显偏小,表现出差异。从植株个体的生长情况看,转基因泡桐的长势存在不均匀性,个体的株高差异较大。对两者存活率的比较发现,无论转基因泡桐还是未转基因泡桐,存活率均有下降的趋势,可能泡桐的有性繁殖效果较差。在三个转基因系泡桐中,存活率也存在着一定的差异,生长前期和生长后期,L6株系的存活率均最高,L11株系次之,L15株系最低且与前两者相差较大。未转基因泡桐的存活率比转基因泡桐高,两者存在明显的差异。对植株表型的观察,发现5株转基因泡桐苗出现花蕾,但未开花。并且在移栽入苗圃前就死亡。 本研究为转基因技术在植物的遗传改良方面的应用提供一定的参考依据,也为转基因泡桐的应用和推广提供一定的理论依据。