【摘 要】
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目的:研究钠氢交换体-1(sodium/hydrogen exchanger1,NHE-1)及其阻断剂在高盐诱导乳鼠心肌成纤维细胞(Cardiac fibroblasts,CFs)增殖、胶原分泌及钙离子调控中的作用。方法:采用
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目的:研究钠氢交换体-1(sodium/hydrogen exchanger1,NHE-1)及其阻断剂在高盐诱导乳鼠心肌成纤维细胞(Cardiac fibroblasts,CFs)增殖、胶原分泌及钙离子调控中的作用。方法:采用组织块贴壁法培养乳鼠CFs,传至3-4代于镜下观察CFs的形态,免疫荧光法行CFs标志蛋白波形蛋白鉴定。分组:对照组(Na+139mmol/L),高盐组(Na+161mmol/L),高盐+Cariporide组(Na+161mmol/L+Cariporide 5μmol/L、10μmol/L、15μmol/L、20μmol/L、25μmol/L),培养48h后,MTT法和EdU检测CFs的增殖状况并确定Cariporide浓度。ELISA法检测CFs培养上清液中胶原I(collagenI,COL1)、胶原III(collagenIII,COL3)含量;酶学比色法检测Ca2+-ATPase和Na+/K+-ATPase活性;比率荧光法检测各组CFs内Ca2+浓度及pH;Western Blot检测CFs中COL1、COL3、NHE-1、NCX-1蛋白表达。结果:MTT法显示,NHE-1受体阻断剂Cariporide在10μmol/L时开始对细胞增殖有抑制作用;EdU结果表明,与对照组相比,高盐组CFs增殖明显,Cariporide阻断后细胞增殖明显抑制(P<0.05)。高盐组COL1、COL3含量增高(P<0.05),细胞内pH及钙离子浓度升高(P<0.05),细胞Ca2+-ATPase和Na+/K+-ATPase活性均降低;Cariporide阻断后CFs细胞增殖受抑制,COL1、COL3含量降低(P<0.05),细胞内pH及钙离子浓度有所降低(P<0.05),Ca2+-ATPase和Na+/K+-ATPase活性升高(P<0.05)。与对照组相比,高盐组COL1、COL3、NHE-1和NCX-1蛋白表达上调(P<0.05),阻断了NHE-1后,COL1、COL3、NHE-1及NCX-1蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论:(1)NHE-1阻断剂Cariporide可抑制高盐诱导的CFs增殖及COL1、COL3分泌与表达;(2)阻断NHE-1可降低高盐诱导的CFs内pH和钙离子浓度升高。(3)阻断NHE-1可逆转高盐诱导的CFs钠泵和钙泵活性降低以及NHE-1和NCX-1蛋白表达增高。
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