论文部分内容阅读
目的：脓毒症(sepsis)是指病原微生物入侵机体感染后所致的全身炎症反应综合征(systemic inflammatory responessyndrome，SIRS)，重症脓毒症(severe sepsis)、脓毒症性休克(septic shock)及多器官功能障碍综合征(multiple organdysfunction syndrome，MODS)是脓毒症的后续症。本研究观察不同时间、应用相同剂量地塞米松对严重感染大鼠血清中白细胞介素-18(interleukin-18，IL-18)和皮质醇生成的影响，以期为临床积极治疗严重感染及感染性休克提供有利的实验依据。通过检测血清中皮质醇浓度来研究脓毒症大鼠相对肾上腺皮质功能不全(relatived adrenal Insufficiency,RnI)的总体发病率。
方法：本研究应用盲肠结扎穿孔法(cecal ligation andpuncture，CLP)复制严重感染动物模型，采用小剂量促肾上腺皮质激素(adrenocorticotropic hormone，ACTH)刺激试验后检测大鼠血清中皮质醇浓度，并给予地塞米松治疗，观察相同剂量、不同时间应用地塞米松对严重感染大鼠血清白细胞介素-18(interleukin-18，IL-18)和皮质醇浓度的影响。Wistar大鼠92只，随即分为5组。(1)模型组(n=20)，CLP后6小时腹腔注射ACTH 0.8μg/kg；(2)地塞米松预处理组(n=20)，CLP术前腹腔注射地塞米松10mg/kg，CLP后6小时腹腔注射ACTH 0.8μg/kg；(3)地塞米松治疗组(n=20)，CLP后6小时腹腔注射ACTH 0.8μg/kg，CLP后7小时腹腔注射地塞米松10mg/kg；(4)假手术组(n=16)；术后6小时腹腔注射ACTH0.8μg/kg：(5)正常组(n=16)。前3组下分5个亚组为2、4、6、8、12h。每个亚组的动物按各亚组分组时间点由右颈总动脉测压管处缓慢采血2.5ml，离心后留取血清，于-70℃冻存。实验结束后采用酶联免疫吸附试验(Enzyme LinkedImmuno-Sorbent Assay,ELISA)测定血清中IL-18含量。每只动物均于注射ACTH前(T0)、注射后30min(T30)、60min(T60)由颈动脉测压管缓慢采血1ml，将每份血样离心后留取血清，于-70℃冻存，全部实验结束后采用液相平衡放射免疫分析法(Radioimmunoassay,RIA)测定血清中皮质醇含量。将T30和T60与T0的差值的最大值记做△Max。若△Max小于0则认为是相对肾上腺功能不全。
结果
1、假手术组血清中IL-18浓度高于正常组(44.603±9.973 VS30.433±5.064pg/ml，P<0.05)。
2、模型组血清中IL-18浓度明显高于假手术组(120.310±24.686pg/ml VS 44.603±9.973pg/ml，P<0.01)。
3、CLP后，大鼠血清中IL-18的浓度在4小时比2小时明显升高(114.000±11.455 pg/ml VS 148.500±4.808 pg/ml，P<0.05)，6小时比4小时降低(96.235±11.138 pg/ml VS148.500±4.808 pg/ml，P<0.05)，12小时比6小时又升高135.105±35.843 pg/ml VS 96.235±11.138 pg/ml，P<0.05)。
4、地塞米松预处理组中7例(7/20)，发生率为35％；治疗组7例(7/20)，发生率为35％；模型组8例(8/20)，发生率为40％。
5、严重感染伴RAI患鼠中地塞米松预处理组基础皮质醇水平明显高于模型组(23.906±5.569ng/ml VS 14.254±3.414ng/ml，P<0.05)和治疗组(23.906±5.569ng/ml VS 15.077±2.500ng/ml，P<0.05)，而治疗组中RAI患鼠基础皮质醇水平与模型组相比无显著差异(15.077±2.500ng/ml VS 14.254±3.414ng/ml，P>0.05)。严重感染不伴RAI的患鼠地塞米松预处理组、治疗组、模型组基础皮质醇水平均高于假手术组(分别为19.385±6.358ng/ml VS 8.566±1.947ng/ml，P<0.01；16.116±5.601ng/ml VS 8.566±1.947ng/ml，P<0.011；13.075±3.504ng/ml VS 8.566±1.947ng/／ml，P<0.05)，预处理组基础皮质醇水平显著高于模型组fP<0.01)，与治疗组相比没有显著差异(P>0.05)。地塞米松预处理组中RAI患鼠基础皮质醇水平明显高于不伴有RAI患鼠(P<0.05)，治疗组和模型组中RAI患鼠基础皮质醇水平与不伴有RAI患鼠无显著差异(P>0.05)。
6、地塞米松预处理组大鼠血清中IL一18浓度明显低于模型组，(67.784±16.896pg/ml VS 120.310±24.687pg/ml，P<0.05)；地塞米松治疗组大鼠血清中IL-18浓度明显低于模型组(88.101±16.260pg/ml VS 120.310±24.686pg/ml，P<0.05)。地塞米松预处理组大鼠血清中IL-18浓度明显低于治疗组(67.783±16.897pg/ml VS 88.101±16.260pg/ml，P<0.05)。
地塞米松预处理组各亚组内伴有与不伴有RAI大鼠血清IL-18浓度，两者无显著性差异(2h：51.300±9.207pg/ml VS51.905±8.975pg/ml，P>0.05；4h：78.850±5.869pg/ml VS86.030±13.097pg/ml.P>0.05；6h：68.900±13.435pg/ml VS66.476±11.126pg/ml，P>0.05；8h：68.159±22.637pg/ml VS75.917±5.972pg/ml，P>0.05；12h：64.895±12.155pg/ml VS73.540±13.734pg/ml，P>0.05)。治疗组各亚组内伴有RAI与不伴有RAI大鼠血清IL-18浓度，两者有显著性差异(8h：88.695±19.607pg/ml Vs 78.500±22.203pg/ml，P<0.05；12h：95.758±11.146pg/ml Vs 83.133±16.096pg/ml，P<0.05)。
结论:
1、本实验采用CLP法可成功复制由腹腔感染导致的严重感染大鼠动物模型，并将ACTH刺激试验用于严重感染大鼠动物模型，成功制备了严重感染伴RAI大鼠动物模型，从基础实验研究方面进一步证实严重感染患鼠RAI发生率与临床相近。
2、损伤和感染都可引起大鼠血清中IL-18浓度的升高。模型组大鼠血清中IL-18的浓度高于假手术组，预处理组治疗效果好于治疗组，预处理组和治疗组IL-18的浓度低于模型组。RAI大鼠血清基础皮质醇含量明显高于不伴RAI大鼠，表明严重感染伴RAI大鼠皮质醇含量绝对值是升高的，但仍处于相对不足状态。预处理组皮质醇含量显著高于治疗组和模型组，从炎症介质水平观察，治疗组非RAI患鼠比RAI患鼠对地塞米松作用更敏感。