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目的旨在探究ADSCs作为血友病A基因治疗靶细胞的可能性,将一含B区缺失的人凝血因子Ⅷ基因(B-domain deleted human coagulant factorⅧ,BDDhFⅧ)的重组腺病毒载体体外感染SD(Sprague Dawley,SD)大鼠脂肪干细胞(adipose tissue-derived stem cells,ADSCs)。方法1细胞培养与鉴定:无菌条件下采用胶原酶消化法取SD大鼠两侧腹股沟脂肪组织并分离培养ADSCs,传至P3代用MTT法检测细胞生长曲线;流式细胞仪检测细胞表面标志;成骨/成脂诱导剂检测干细胞多向分化潜能。2实验分组:A组为Ad-BDDhFⅧ-GFP感染ADSCs组,B组为Ad-GFP感染ADSCs组,C组为正常培养ADSCs组;3采用CCK-8法检测三组感染后细胞生长情况,ELISA法检测细胞上清中FⅧ抗原表达水平,RT-PCR及Western blot分别检测感染后三组细胞内BDDhFⅧ基因和蛋白表达情况。结果1经鉴定分离培养的P3代细胞呈螺旋状、梭型排列,MTT法检测其生长曲线呈倒“S”形;流式细胞学检测P3代细胞CD29(99.05%)、CD90(97.82%)、CD44(92.41%)阳性表达,CD45(8.38%)阴性表达;经成脂诱导14d后,Oil Red O染色呈阳性;成骨诱导7d后ALP染色呈深蓝色,成骨诱导30d后,茜素红染色提示矿化结节。2重组腺病毒载体Ad-BDDhFⅧ-GFP感染ADSCs24h后可见绿色荧光,72h荧光表达强度最强,最佳MOI为350。3 CCK-8检测感染后三组对细胞仍呈倒“S”曲线生长。4 ELISA结果显示三组感染ADSCs72h后,A组hFⅧAg表达(140.26±2.29)明显高于B组(99.95±1.05)与C组(80.02±0.21),差异具有统计学意义(P<0.05)。5 RT-PCR结果显示:三组感染ADSCs后72hA组有BDDhFⅧ基因表达;B、C组无BDDhFⅧ基因表达。6Western blot检测示三组感染ADSCs72h后,A组hFⅧ蛋白表达(1.10±0.57)明显高于B组(0.60±0.20)与C组(0.33±0.12),差异具有统计学意义(P<0.05)。结论1腺病毒携带的B区结构域缺失的人凝血因子Ⅷ基因载体可成功感染SD大鼠ADSC。2感染后的细胞能够有效的表达人凝血因子FⅧ。图9幅;表4个;参61篇。