球孢白僵菌油剂剂型改进的研究

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真菌杀虫剂的剂型加工水平与产品质量直接影响到真菌杀虫剂在农林害虫防治上的应用。世界范围内开发的最成功的真菌杀虫剂油剂产品为GreenMuscle?(黄绿绿僵菌(Metarhizium flavoviride)产品),被广泛应用于干旱地区沙漠蝗虫的生物防治。而在中国国内,除本实验室在90年代对球孢白僵菌的油剂剂型进行了研究,并开发出951产品外,还未见其它产品获得登记。但951产品的最大缺陷在于储存期短,常温储存240天,孢子萌发率仅为40%。为全面改变这种状态,本研究对白僵菌油剂的精确检测方法、高品质纯孢子粉的生产及各种新型高效助剂的筛选与配伍进行了全面而深入的研究,从而最终达到极大提升白僵菌油剂产品质量的目的。本研究确定了乳化剂与孢子萌发液相结合测定孢子萌发率的方法。在对两种新型非离子型表面活性剂AEO-X、NPE-Y和Tween80的比较试验中发现:AEO-X在各种浓度下都对孢子的萌发造成极大的抑制作用:Tween80和较高浓度的NPE-Y对孢子的萌发也可造成不利影响;但0.01%和0.05%浓度的NPE-Y对孢子萌发没有不利影响,这两个处理的孢子萌发率分别为88.65%和85.88%,与对照89.78%差异不显著。因此,选择含有0.01%非离子型乳化NPE-Y的孢子萌发液做为油剂孢子萌发率的测定体系。该体系培养时间以36h最佳,此时测定的孢子萌发率为90.37%,与对照90.751基本相同。通过对孢子粉生产方法的改进,生产出含水率、含孢量和孢子萌发率分别为9.7±1.7%、1300亿/g和97.5±2.1%的高品质高孢粉。该生产孢子粉方法的产粉量和产孢数分别为15.4mg/g和2.4×109个/g,经常温真空干燥(负0.1大气压)2h、6h和12h便可将孢子粉的含水率降至8%、6%和4%以下。溶剂油的筛选表明,A油最有利于白僵菌孢子的贮存。在不添加其它任何助剂的情况下,将白僵菌孢子粉以30%的质量百分比贮存其中,常温条件下两个月后,孢子的萌发率仍高达81.74%,仅比对照值(84.25%)低2.51%,与大豆色拉油、食品级白油、医用石蜡油及A油的其它浓度处理相比,均达差异极显著水平。在抗紫外剂筛选中,新型纳米材料在剂型加工中表现出极好的抗紫外线性能。在供试的四种材料抗B、纳米ZnO、Fe2O3和抗坏血酸中,优选出的抗紫外剂纳米抗B,在油剂中添加量为0.5%和1%时,经紫外灯(18W,照射高度40cm)照射处理4.5h后,孢子的萌发率为67.57%和68.19%,与其它所有处理的孢子萌发率均达差异达极显著水平,与对照组5.94%的孢子萌发率相比,高出60%以上,差异极显著。抗氧化剂研究结果显示,在使用剂量为0.3%、0.9%和2.7%的抗氧化剂B处理组中,常温贮存60天,其孢子的萌发率分别高达82.64%、82.68%和82.34%,三者差异不显著,但与其它抗氧化剂处理间的差异达显著水平。故在油剂剂型加工中添加0.3%的氧B作为抗氧化剂的最佳配伍。在3种悬浮稳定剂悬A、悬浮稳定剂H-338和棕榈酸异辛酯(2EHP)的比较试验中,悬浮稳定剂H-338和棕榈酸异辛酯(2EHP)与白僵菌孢子长期混合均会对孢子的萌发造成不利影响,而悬A在长期贮存中对孢子的影响最小,在0.3%浓度以下时,与对照差异不显著。故确定悬A作为白僵菌油剂的悬浮稳定剂,0.3%作为其最佳使用浓度。在不同室温对白僵菌油剂长期贮存的影响试验中,在两种不同温度变化曲线的制剂室和固体发酵室中贮存的油剂产品,其孢子的萌发率呈现了不完全相同的变化趋势。由于制剂室在夏季的温度可高达37℃,比发酵室高2-3℃,在进入4月份后,两种室温下的孢子萌发率逐渐呈现差异,制剂室的贮存产品孢子萌发率比发酵室低5个百分点左右。在贮存满一年后,两种室温下孢子的萌发率分别为58.17±0.24%和63.71±0.22%,结果显示出高温对油剂的长期贮存还是存在着不利的影响。但新产品的长期贮存性能远远优于951白僵菌油剂。在白僵菌油剂产品与化学农药相容性检测试验中,不同种类与浓度的化学农药对孢子萌发的影响差异显著。在添加剂量为30%的杀灭菊酯和吡虫啉处理组中,孢子的萌发率急剧下降,一周内活力全部丧失;3%剂量中,杀灭菊酯处理组在贮存1d后的孢子萌发率就仅为31.99%,一个月内便降至10%以下,而吡虫啉处理组在贮存1周后,孢子萌发率仍接近50%,一个月为26.84%;而在0.3%的低剂量处理中,杀灭菊酯处理组在贮存一周后孢子萌发率仍可达近50%,而吡虫啉处理组在贮存56d后孢子萌发率仍可达68.06%,显示出作为白僵菌油剂增效剂的应用潜力。
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