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目的应用实时荧光定量PCR(RQ-PCR)技术检测不同病程慢性粒细胞白血病(CML)bcr/abl mRNA水平;研究发生伊马替尼(IM)耐药的CML患者BCR/ABL融合基因ABL激酶区点突变的发生情况方法收集26例慢性期患者(包括初诊患者10例以及应用伊马替尼治疗患者16例)和19例进展期(8例加速、11例急变期)患者的骨髓,应用RQ-PCR方法检测骨髓细胞中bcr/abl mRNA融合转录本水平;采用巢式逆转录PCR(RT-PCR)扩增10例CML慢性期患者和13例发生伊马替尼耐药患者的骨髓标本,检测bcr/abl融合mRNA的abl激酶区,纯化、测序并进行序列同源性分析。结果(1)26例CML慢性期患者bcr/abl mRNA表达量中位数为0.72×10~4 [(0.13—2.4)×10~4]copies/10~5个有核细胞,各例之间差异甚大。8例加速期标本bcr/abl mRNA表达量中位数为3.6×10~4 [(0.26—4.7)×10~4]copies/10~5个有核细胞,11例急变期标本bcr/abl mRNA表达量中位数为4.3×10~4 [(0.18—8.3)×10~4]copies/10~5个有核细胞,加速期和急变期患者的转录本水平明显高于慢性期患者,经统计学检验,两者差异有显著性(P<0.05)。而加速期患者与急变期患者之间差异无统计学意义( P>0.05)。16例应用伊马替尼患者在治疗前及治疗后6,12个月时对其进行检测。在6个月时,11例患者达到主要细胞遗传学缓解(MCyR),8例患者获得完全细胞遗传学缓解(CCyR)。12个月时,16例患者均达到MCyR,其中12例患者获得CCyR。获得MCyR患者与治疗前相比,bcr/abl mRNA水平下降了2个对数级以上,获得CCyR患者与治疗前相比,bcr/abl mRNA水平下降了3个对数级以上。8例在6个月达到CCyR后,12个月时再检测时bcr/abl mRNA水平继续下降,有2例甚至检测不到。(2)产生耐药的13例患者中6例检出点突变(6/13 46.2%),类型分别为E255V 1例,Q252H 3例,E279K 1例,M351T 1例。3例表现为纯合型点突变(1例为加速期开始服药后出现耐药,2例为急变期开始服药后出现耐药的患者),3例为野生与突变型ABL同时存在。10例慢性期患者在伊马替尼治疗期间均未检测到基因突变。结论(1)RQ-PCR方法准确可靠,敏感性高。对于伊马替尼治疗患者,连续定量观察bcr/abl mRNA水平比单一的结果更有价值,伊马替尼治疗后获CCyR者bcr/abl mRNA水平下降迅速。(2)ABL激酶区点突变是伊马替尼治疗CML失效的主要原因之一。发生伊马替尼耐药的患者BCR/ABL基因ABL激酶区存在高频率的点突变,定期监测ABL激酶区点突变有助于及早采取干预治疗,提高疗效。