论文部分内容阅读
研究背景:青藤碱(sinomenine,SIN)作为一种生物碱单体,是从防己科植物青风藤中提取的。其药理作用包括抗炎症及免疫抑制等,多以其盐酸盐形式用药。青藤碱现在已经广泛用于治疗多种炎性或自身免疫性疾病,如类风关和系统性红斑狼疮等,临床疗效较好,但有待深入研究其作用机制。而高迁移率族蛋白B1(high mobility groupbox1, HMGB1)与多种自身免疫性疾病紧密相关。HMGB1作为一种可以级联放大炎症效应的关键细胞因子,已经成为进行抗炎症治疗和免疫抑制非常具有吸引力的新靶标。自噬是一种清除异常积聚蛋白的过程,主要包括对自噬底物的识别,再形成自噬囊泡,最后与溶酶体融合。目前已有大量研究表明,自噬与各种炎症因子的加工过程关系密切。但是,关于盐酸青藤碱在治疗炎症过程中的具体作用机制是否与自噬、炎症因子HMGB1之间存在相互调节的关系尚无报道。弄清该问题,可以阐明三者在炎症中的相互作用以及机制,为治疗多种炎性、自身免疫性疾病提供新的思路及策略。研究目的:明确治疗炎症过程中盐酸青藤碱与自噬、炎症因子HMGB1的联系和对炎症的影响。研究方法:选取人内皮细胞EA.hy926为细胞模型。经盐酸青藤碱分别在基础水平及LPS诱导下处理12h或1h后,利用western blot法检测自噬标志性蛋白LC3II和pERK1/2的表达变化;利用荧光显微镜观察GFP-LC3标记或吖啶橙染色的自噬体的细胞内分布情况;另外加入ERK1/2通路抑制剂U0126观察LC3II蛋白量和自噬体数量的变化。利用RT-PCR和western blot法检测HMGB1的表达;经自噬抑制剂CQ作用,采用RT-PCR和western blot法检测HMGB1表达的变化。研究结果:(1)盐酸青藤碱在基础水平及LPS诱导水平,促进人内皮细胞EA.hy926中的LC3II的表达并增加自噬体的形成,使用ERK1/2通路抑制剂U0126可抑制该作用;(2)盐酸青藤碱在基础水平及LPS诱导水平,下调人内皮细胞EA.hy926中的HMGB1的表达,使用自噬抑制剂CQ可逆转该作用。结论:盐酸青藤碱在血管内皮细胞中可通过ERK1/2途径激活自噬并下调细胞内的HMGB1而发挥抗炎作用。