分子印迹分散固相萃取-高效液相色谱法测定人参中唑菌胺酯

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在本文中,为了检测人参样品中唑菌胺酯的含量,建立了分子印迹分散固相萃取(MIDSPE)结合高效液相色谱(HPLC)法。此方法中用分子印迹聚合物(MIPs)作为分散固相萃取过程的吸附剂。首先通过沉淀聚合反应制备分子印迹聚合物,聚合过程分别使用唑菌胺酯作为模板分子,甲基丙烯酸(MAA)作为功能性单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)和偶氮二异丁腈(AIBN)作为交联剂和引发剂。混合溶剂丁酮(MEK)和正庚烷(7:3,V:V)用作溶剂和致孔剂。通过激光粒度分析仪,扫描电子显微镜(SEM)和傅里叶变换红外光谱(FTIR)对聚合成功的印迹微球进行了表征。扫描电子显微镜图像显示了MIPs和NIPs的形态样貌,图像显示MIPs比NIPs具有更规则的形状和光滑的表面。粒度分析结果显示MIPs和NIPs的微球均呈正态分布。但是,NIPs分布更为广泛,MIPs具有较窄的粒径分布。这表明在整个微球聚合过程中,模板分子会对粒度分布产生影响。FTIR光谱图的结构表明印迹微球的结构骨架中模板分子,功能单体(MAA)和交联剂(EGDMA)成功参与了反应。平衡吸附实验表明印迹聚合物对模板分子具有很高的结合能力,MIPs和NIPs对唑菌胺酯的最大吸附量分别为73.01 mg·g-1和59.14 mg·g-1。MIPs和NIPs的Scatchard模型拟合曲线均为直线,表明印迹微球中的活性位点仅存在一种类型。计算得MIPs的表观最大数量Qmax为73.01 mg·g-1,高于NIPs的59.14 mg·g-1。MIPs和NIPs的平衡解离常数(Kd)分别为86.58 mg·L-1和502.50 mg·L-1。Langmuir等温线表明,MIPs中每个吸附位都有相同的吸附特性,MIPs对唑菌胺酯的吸附是一种单分子层吸附。这些结果表明,MIPs的吸附位点是均匀且特定的。选择性吸附实验证实了印迹聚合物对唑菌胺酯的吸附性能是一种特异吸附,并且具有对唑菌胺酯的选择性识别位点。运用分子印迹分散固相萃取(MIDSPE)联用液相色谱(LC)法测定人参中唑菌胺酯的残留量。本实验用传统吸附剂C18与制备出的MIPs作为吸附剂进行对比实验。测定结果显示,向空白人参样品中添加0.05、0.1、1.0 mg·kg-1的唑菌胺酯的回收率在77.60%和93.15%之间,相对标准偏差(RSD)在2.47%和6.99%之间(n=5)。而使用C18作为吸附剂的唑菌胺酯的回收率为53.04-63.86%,相对标准偏差为1.07-4.99%。以上数据表明,人参样品中唑菌胺酯的分析方法可实现良好的回收率,可重复性和再现性。此方法的线性回归方程通过计算得y=2.09935e-006x+0.0176235(R2=0.998656)。检出限(LOD,S/N=3)为0.01 mg·kg-1。斜率在95%置信度下的置信区间为[356084.1828,899542.8563],截距的置信区间为[-755349.2710,72645.0856]。通过本研究MIDSPE-HPLC方法体现出对人参样品中痕量唑菌胺酯的特异性选择,并成功分离和富集了唑菌胺酯。对人参实际样品进行了测定,测得结果显示人参中唑菌胺酯的残留量均低于欧盟的最大残留限量(MRL)0.1mg·kg-1
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