病毒性传染病严重威胁着人类的健康,随着世界经济的快速发展和全球化步伐的加快,新发、突发病毒性传染病接踵而至并蔓延流行。由于新发病毒性传染病发现时间短,许多安全且有效的疫苗和药物仍处于研发阶段,小分子药物对治疗病毒性传染病存在巨大潜力,可利用天然或合成化合物筛选抗病毒活性物质,以期找到特异性高、毒性小的抗病毒药物,解决传染病病原体感染机制不明情况下药物研发的盲目性。本研究依托中检院拥有的中药化学提取物对照品库、上市药物库,前期建立的安全灵敏的假病毒、活病毒高通量细胞筛选平台及动物体内抗病毒效力验证模型,对5型腺病毒(Adenovirus type 5,Ad5)、汉滩病毒(Hantaan virus,HTNV)、呼吸道合胞病毒(Respiratory Syncytial Virus,RSV)等多种病毒进行了高通量药物筛选及验证,发现药物的抗病毒新适应症,为抗病毒药物的研发提供线索,为突发疫情处置提供战略物质储备。目的1.从中药化学提取物对照品库和上市药物库中筛选出具有抗病毒活性的药物。2.通过体内实验和体外实验两方面验证药物的抗病毒效果,为抗病毒药物的研发提供线索。方法1.利用高通量细胞筛选方法从556份中药化学提取物和1813份上市药物中筛选出具有抗病毒活性的药物。2.利用小动物活体成像技术、实时荧光定量PCR、免疫印迹实验、添加时间实验等对体外筛选出的药物进行验证,进一步评价药物的抗病毒效果。结果1.活病毒细胞水平上筛选到3个抗Ad5的药物,分别为11-40、ZY-28和ZY-103,EC50值分别为1.20μM、4.04μM和4.5μM。其中,ZY-28也具有抗Ad3活性,EC50值为2.4μM,小鼠实验表明ZY-28可极大的抑制腺病毒感染导致的肝组织坏死,对感染小鼠的组织有保护作用。2.假病毒细胞水平上筛选到4个抗HTNV的药物,分别为2-21、18-10、18-13和 ZY-128,EC50值分别为0.1μM、0.2μM、0.2μM 和 0.9μM。体内验证实验显示只有ZY-128在体内具有抗病毒效果,给药剂量为150mg/kg/d时对病毒的抑制率可达94%。活病毒验证实验提示药物在20μM时对病毒有一定的抑制效果,ZY-128主要的作用阶段为病毒进入和膜融合阶段。3.活病毒细胞水平上筛选到6个抗RSV的药物,分别为2-21、20-37、8-11、7-55、11-40 和 21-67,EC50 值分别为0.15μM、0.17μM、0.23μM、1.38μM、1.78μM和1.38μM,Western blot 验证实验中 2-21、20-37、8-11、7-55、21-67均不同程度抑制F蛋白的表达,其中2-21、8-11、21-67 3个药物的作用阶段主要是膜融合时期和进入后抑制,7-55的作用阶段是病毒进入和膜融合阶段。结论1.通过在细胞水平上对556份中药和1813份上市化药的筛选,分别得到3个抗Ad5的药物、4个抗HTNV的药物和6个抗RSV的药物。2.通过动物实验、免疫印迹实验、添加时间实验、实时荧光定量PCR等实验验证,发现1个较好的抗Ad5活性的药物、1个抗HTNV活性的药物和5个抑制RSV F蛋白表达的药物。