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目的IL-33是与多种炎症性疾病发病相关的炎症性细胞因子。有研究发现在CAVD组织标本中IL-33受体ST2表达水平升高。本研究拟对比纤维增厚期与钙化期CAVD标本α-SMA、OPN和ST2的表达情况并探索IL-33对猪VICs表型转化的影响及其作用机制。方法分别入组CAVD患者和健康成年人49人与53人,通过Real Time RT-qPCR和ELISA法检测IL-1家族成员在外周血的mRNA和蛋白水平。免疫组化和免疫荧光检测纤维增厚期和钙化期CAVD标本,观察两组主动脉瓣标本α-SMA、OPN和ST2的表达情况。分离培养原代猪VICs,给予IL-33刺激或给予NF-κB信号通路抑制剂SC75741及p38 MAPK信号通路抑制剂SB203580处理后,通过Real Time RT-qPCR和Western Blot检测α-SMA、Runx2、OPN和ST2的mRNA与蛋白表达情况,通过Western Blot检测NF-κB和p38 MAPK信号通路蛋白磷酸化水平。通过siRNA慢病毒感染敲减猪VICs的ST2基因。通过免疫荧光染色明确α-SMA、OPN和ST2在VICs中的共表达情况。结果我们发现CAVD患者外周血IL-33和sST2的mRNA与蛋白水平均高于健康成年人。免疫组化和免疫荧光结果显示钙化期CAVD标本的α-SMA、OPN和ST2水平均显著高于纤维增厚期,且仅在钙化期标本中发现α-SMA/ST2或OPN/ST2共表达,而在钙化期和纤维增厚期标本中均未发现α-SMA、OPN和ST2三者共表达。分别使用IL-33、IL-33+SB203580和IL-33+SC75741刺激猪VICs,结果表明NF-κB磷酸化水平上调与IL-33诱导猪VICs向肌成纤维细胞分化有关,而p38MAPK磷酸化水平上调则介导猪VICs获得成骨细胞表型。此外,p38MAPK磷酸化水平上调与ALP活性增强相关。抑制NF-κB和p38MAPK蛋白磷酸化可分别抑制α-SMA和OPN的表达。给予IL-33刺激后能诱导猪VICs出现ST2/OPN或α-SMA/OPN/ST2共表达。通过si-RNA慢病毒敲减ST2基因表达后,以上所有效应均被抑制。结论IL-33可能是诊断CAVD的生物标记物。IL-33刺激猪VICs可分别激活NF-κB和p38 MAPK信号通路并诱导其差异性表型转化,从而向肌成纤维细胞和成骨细胞分化。