常山胡柚类黄酮化合物制备及应用开发

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常山胡柚具有较大的药用价值,特别是果皮中含有丰富的类黄酮化合物(Flavonoid Compound,FC)、挥发油等活性成分。如何开发常山胡柚的药用价值,助推农业产业发展,是专家学者、企业主体研究的重要方向。本文对胡柚类黄酮化合物提取、分离纯化工艺进行研究,常山胡柚类黄酮化合物有效成分含量测定,并开展有效成分抗炎功效评价和功能性复配产品开发。1.常山胡柚类黄酮化合物提取和纯化工艺研究。以胡柚皮为原料,获得常山胡柚类黄酮化合物粗提物提取优化方案为:提取2次,水:胡柚皮为10:1,温度100℃,时间为1 h,常山胡柚类黄酮化合物粗提物得率为21.17%;以常山胡柚类黄酮化合物粗提物为原料,开展大孔树脂精制纯化实验,获得优化工艺参数:上样溶液为常山胡柚类黄酮化合物粗提物,溶度为3.68 mg/ml,上样量为5.00 m l/g,采用75%的乙醇洗脱,PH值为4.50,洗脱率达到89.72%;采用高效液相质谱测定常山胡柚类黄酮化合物粗提物柚皮苷、新橙皮苷平均含量为6.24%、4.50%;常山胡柚类黄酮化合物精制干粉中柚皮苷、新橙皮苷平均含量为50.02%、36.10%。纯化后的常山胡柚类黄酮化合物精制干粉中柚皮苷和新橙皮苷总含量是纯化前的8.03倍。2.常山胡柚类黄酮化合物精制干粉抗炎功效评价研究。分别建立脂多糖(LPS)诱发转基因中性粒细胞荧光标记、转基因巨噬细胞荧光标记的炎症斑马鱼模型。考察常山胡柚类黄酮化合物精制干粉对炎症斑马鱼抗炎作用、对炎症相关基因表达的影响,并进行组织病理学分析实验。通过实验得到斑马鱼对常山胡柚类黄酮化合物精制干粉最大耐受溶度为8000μg/m L。设置1个正常对照组,1个模型对照组,1个阳性对照组吲哚美辛浓度为60μg/m L,3个实验组常山胡柚类黄酮化合物精制干粉浓度分别为889、2667和8000μg/m L。斑马鱼炎症部位的中性粒细胞个数:正常对照组3个,模型对照组22个,阳性对照组13个,3个实验组分别为17个、14个、15个。炎症消退作用:阳性对照组40.90%,3个实验组分别为22.70%,36.40%,31.80%;斑马鱼炎症部位荧光信号强度:正常对照组71961像素,模型对照组757860像素,阳性对照组371000像素,3个实验组分别为520175、310845和435642像素。巨噬细胞改善作用:阳性对照组达到51%,3个实验组分别为31.40%、59%和42.50%。分别与中性粒细胞炎症、巨噬细胞炎症模型对照组比较,说明在实验浓度下常山胡柚类黄酮化合物精制干粉对中性粒细胞、巨噬细胞炎症都具有显著抗炎作用。通过提取、测定斑马鱼RNA的浓度,开展荧光PCR的实验。对TGFβ-1相对表达量:正常对照组1.03,模型对照组5.79,阳性对照组2.48,3个实验组为3.27、1.90和3.19;对IL-1β基因相对表达量:正常对照组1.10,模型对照组11.91,阳性对照组1.83,3个实验浓度组为4.28、5.80和6.21。计算得出,说明3个实验组常山胡柚类黄酮化合物精制干粉对炎症相关基因TGFβ-1、IL-1β都表现出极显著的抗炎作用。3.功能性复配产品开发研究。以常山胡柚类黄酮化合物精制干粉与西洋参提取物复配制备片剂型产品。
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