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用随机克隆法,建立柞蚕核型多角体病毒(Antheraea pernyi nucleopolyhedrovirus,ApNPV)的质粒基因组文库:通过对插入片段进行克隆鉴定和序列分析,首次获得ApNPV的晚期表达因子3(later expression factor 3,lef-3)基因、蜕皮甾体尿苷二磷酸葡萄糖基转移酶基因(ecdysteroid UDP-glucosyltransferase,egt)、晚期表达因子1(lef-1)等基因,对其进行同源性比对分析。克隆得到了ApNPV PstI和XhoI两个片段,其中一个片断经序列分析表明:该片段含有完整的lef-3基因,与其它来源的lef-3基因具有很高的同源性。ApNPV lef-3基因的阅读框为1110个核苷酸,编码369个氨基酸,编码一种DNA单链结合蛋白(single-stranded DNA-binding protein,SSB)。在lef-3基因上游的互补序列有一编码127个氨基酸序列的不完全的阅读框。 第二个片段总长度为3388 bp,经序列分析表明:该片段包括5个完整读码框,与苜蓿银纹夜蛾多粒包埋核型多角体病毒(Autographa californica nucleopolyhedrovirus,AcNPV)ORF13/OpNPV ORF12同源性较高的基因、晚期表达因子1(later expression factor 1,lef-1)、缺失的Ecdysteroid UDP-Glucosyltransferase基因(egt)、da26、da16。其中egt基因编码蜕皮甾体尿苷二磷酸葡萄糖基转移酶;lef-1编码的是晚期表达因子1(LEF-1),分析得到LEF-1的氨基酸序列有3个高度保守同源区,具有引发酶的活性:da26基因编码结构蛋白BV/ODV-E26,这个蛋白在出芽型病毒(budded virus,BV)和包埋型病毒(occlusion-derived virus,ODV)中都存在。 本论文首次应用家蚕-杆状病毒表达系统表达嗜酸性α-淀粉酶,此酶基因长3906 bp,编码1301个氨基酸,蛋白质理论分子量140 KD。将克隆进大肠杆菌表达载体pET-22b(+)的amy基因克隆到转移载体pVL1393中,用常规方法获得病毒,感染家蚕后嗜酸性α-淀粉酶得到正确表达,检测表达产物具有淀粉酶活性。