【摘 要】
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目的探讨双氢青蒿素（DHA）和去铁胺（DFO）在肺纤维化发生发展的作用,研究铁自噬相关基因铁蛋白重链（FTH1）及核受体辅激活因子4（NCOA4）在肺纤维化中的作用及机制。方法将人胚肺成纤维细胞（HFL1）在体外培养并随机分为四组:转化生长因子β1（TGF-β1）处理组、转化生长因子β1+去铁胺（TGF-β1+DFO）处理组、转化生长因子β1+双氢青蒿素（TGF-β1+DHA）处理组、空白对照组。
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目的探讨双氢青蒿素（DHA）和去铁胺（DFO）在肺纤维化发生发展的作用,研究铁自噬相关基因铁蛋白重链（FTH1）及核受体辅激活因子4（NCOA4）在肺纤维化中的作用及机制。方法将人胚肺成纤维细胞（HFL1）在体外培养并随机分为四组:转化生长因子β1（TGF-β1）处理组、转化生长因子β1+去铁胺（TGF-β1+DFO）处理组、转化生长因子β1+双氢青蒿素（TGF-β1+DHA）处理组、空白对照组。将HFL1细胞饥饿处理12小时后进行给药处理,药物浓度分别是TGF-β1 6ng/ml、DFO 50μM、DHA 30μM,细胞在各种处理后6小时、12小时、24小时及36小时4个时间点收集细胞及其培养基,进行实时荧光定量多聚核苷酸链式反应（qRT-P CR）、免疫荧光和Fe2+检测。应用qRT-PCR技术检测不同处理组中α-SMA、FT H1及NCOA4的mRNA表达水平,而免疫荧光则用于检测不同处理组中α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、FTH1及NCOA4的蛋白表达水平,并用图像分析方法将蛋白质表达半定量,进行统计学处理。结果与对照组相比,TGF-β1处理组Fe2+水平在早期（6小时）显著升高,随后逐渐降低,FTH1和NCOA4的mRNA和蛋白水平在早期（6小时）显著升高,随后随时间的延长而降低。Fe2+水平、FTH1和NCOA4的表达水平表现出一致的趋势。与TGF-β1处理组相比,TGF-β1+DHA和TGF-β1+DFO处理组α-SMA mRNA和蛋白表达水平在各时间点均明显降低,Fe2+水平在6小时时明显下降,然后逐渐升高;FTH1和NCOA4的mRNA和蛋白水平表达水平随时间呈降低趋势。而DFO处理后Fe2+水平始终低于正常,而DHA导致Fe2+水平高于对照组和TGF-β1处理组。结论我们的研究发现DHA和DFO对肺纤维化发生具有一定的抑制作用。D HA可能通过促进铁自噬的发生进一步发挥其抗纤维化的作用。DFO可能通过导致Fe2+的水平骤降,扰乱了铁的稳态,为恢复铁稳态进而促进细胞发生铁自噬。但DFO处理后Fe2+一直低于正常水平,其引起的细胞死亡很可能是由于不能满足细胞的需求,其准确机制有待进一步研究。
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