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目的:采用腹腔注射对氯苯丙氨酸(PCPA)制备失眠动物模型,将褪黑素(MT)及神经肽Y(NPY)作为靶目标,观察大鼠血清中MT及NPY的含量变化,研究重灸法对失眠效应物质基础的变化影响,为失眠症的重灸治疗提供有力的实验依据。方法:1.采用对氯苯丙氨酸(PCPA)腹腔注射的方法制备大鼠失眠动物模型,将40只雄性健康清洁级SD大鼠(200±10g)采用完全随机法分成五组,正常喂养7天后显示一切正常,随将各组大鼠进行实验处理:A空白对照组,以正常大鼠作为阴性对照;B模型对照组,于实验第1天上午8:00接受腹腔内注射PCPA混悬液,lml/100g,每日一次,连续注射2日;C重灸组,于实验第1天上午8:00开始造模,造模方法同模型对照组,实验第3d开始针对心俞、肝俞、脾俞,行重灸处理,穴位处剪去鼠毛,将准备好的大蒜捣成泥状均匀涂抹于备皮穴位处,促使发泡,用特制鼠笼固定,将精制艾绒制成长20cm,直径8mm的艾条对准穴位处施灸,一次性灸至破溃化脓,然后单笼饲养,期间不行任何处理,共持续6d;D针刺组,于实验第1天上午8:00开始造模,造模方法同模型对照组,实验第3d使用撳针贴于备皮穴位心俞、肝俞、脾俞,用胶布固定,连续治疗6d;E温和灸组,于实验第1天上午8:00开始造模,造模方法同模型对照组,实验第3d使用特制鼠笼固定,用精制艾条温和灸备皮处穴位心俞、肝俞、脾俞共15min,连续治疗6d。2.实验开始过程中,分别于首次造模前、首次治疗前及取材前三个阶段称量大鼠体重变化,并记录数据。3.以上实验结束后取材:麻醉大鼠选用水合氯醛进行腹腔注射,用手术剪及镊子剖开腹腔,剥离出腹主动脉,用一次性注射器抽取动脉血3~5ml置于试管内,离心机3500转离心,取上清液。运用酶联免疫吸附法(ELISA)进行血清褪黑素及神经肽Y含量的检测。4.采用SPSS 20.0统计软件对相关实验数据进行统计学处理,求平均数,作单因素方差分析。结果:1.腹腔注射PCPA混悬液后发现正常大鼠的睡眠—觉醒周期消失,模型对照组大鼠于首次腹腔注射对氯苯丙氨酸混悬液24~36h后,出现昼夜活动节律紊乱,白天活动频繁,部分大鼠情绪明显躁动不安,通过观察对比,与空白对照组有显著差异,提示是复制失眠大鼠模型比较稳定的方法。2.首次造模前,各组大鼠体重处于平稳状态,经比较分析无统计学意义(P>0.05);首次治疗前,经造模后的各组大鼠体重明显减轻与空白组大鼠体重比较分析存在统计学差异(P<0.05);取材前,模型对照组与重灸组、针刺组、温和灸组经分析比较有统计学差异(P<0.05);重灸组、针刺组、温和灸组与空白对照组比较具有统计学显著差异(P<0.05);重灸组与针刺组、温和灸组比较有统计学显著差异(P<0.05);针刺组与温和灸组比较无统计学差异(P>0.05)。3.重灸背俞穴可以明显增加PCPA所致的失眠大鼠其血清内褪黑素及神经肽Y(NPY)的含量,与模型组比较差异显著,具有统计学意义(P<0.01)。4.针刺组可以使PCPA所致的失眠大鼠血清内降低了的褪黑素及NPY含量升高,与模型组比较有极显著差异(P<0.01),存在统计学意义。与重灸组所测实验结果相比较,具有统计学显著差异(P<0.05)。5.温和灸组可以升高PCPA所致的失眠大鼠血清内褪黑素及NPY的含量,与模型组比较有极显著差异(P<0.01),具有统计学意义;与重灸组相比较具有统计学显著差异(P<0.05),与针刺组比较无统计学意义(P>0.05)。结论:1.重灸法对失眠模型大鼠的睡眠功能有明显的调节作用;2.腹腔注射PCPA可使正常大鼠的睡眠—觉醒周期消失,提示PCPA造模是制备失眠较稳定模型;3.模型制备成功后各组大鼠体重下降,重灸法对失眠大鼠的体重调节最为显著;4.重灸对失眠大鼠睡眠—觉醒昼夜节律的调节机制与其对褪黑素的调节有关;5.本实验有力的证实了失眠与神经肽Y相关,其具有调节睡眠的作用,血清中亦可测出神经肽Y物质,且与失眠呈正相关水平。