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目的：在二烯丙基二硫（diallyl disulfide， DADS）通过LIMK1抑制人胃癌细胞增殖与迁移、侵袭的基础研究上，本实验进一步通过miRNA干扰人胃癌BGC823细胞，拟探讨其LIMK1基因沉默后DADS抑制人胃癌BGC823细胞增殖与迁移、侵袭的变化及Rac1-Rock1/Pak1-Limk1-Cofilin1信号通路影响的机制。方法：根据LIMK1基因序列设计：miRNA1、miRNA2、miRNA3、miRNA4四个干扰序列，并设计1条非特异性序列作为阴性对照组。将含靶向LIMK1的miRNA的质粒转染人胃癌BGC823细胞，建立稳定细胞系，通过Western blot、RT-PCR验证其对LIMK1表达的抑制作用；MTT实验用来观察DADS作用和BGC823细胞干扰LIMK1后对增殖的影响；Transwell实验和划痕实验分别观察DADS作用和干扰LIMK1后BGC823细胞侵袭和迁移能力的改变；RT-PCR、Western blot、免疫组化分别检测DADS作用和干扰LIMK1后的BGC823细胞LIMK1的miRNA与蛋白表达。Western blot分别检测Rac1、Rock1、Pak1、cofilin1的蛋白表达。结果：1.构建稳定的pcDNA6.2/Limk1-miRNA/BGC823重组细胞系pcDNA6.2-GW/EmGFPmiR-Limk1-miRNA干扰质粒提取后，将5组干扰质粒分别转入BGC823细胞。经杀稻瘟菌素筛选2w后，实验成功可见转染细胞的胞浆内发绿色荧光。Western blot和RT-PCR结果显示，转染组细胞的LIMK1蛋白表达水平与阴性转染组相比分别下降70.11%、15%、25.12%、72.32%，Limk1-miRNA4/BGC823对蛋白表达的抑制最明显（P<0.05）。后续实验均用Limk1-miRNA4/BGC823细胞作为实验对象。2.干扰Limk1后BGC823细胞增殖的影响。MTT结果显示，干扰LIMK1表达可抑制BGC823细胞增殖。DADS处理后转染细胞组24h后发现，细胞增殖的抑制率明显高于未转染组和转染组(P<0.05)，继续观察48h、72h和96h后结果基本一致，提示干扰LIMK1表达增强了DADS的抑制细胞增殖作用。3.干扰LIMK1对DADS抑制BGC823细胞迁移侵袭能力的影响划痕实验结果显示，将未转染组、转染组及DADS处理转染组的BGC823细胞作比较，取0h、24h和48h三个不同时间段来观察细胞划痕愈合情况，未转染组划痕愈合显著快于转染组及DADS处理转染组的BGC823细胞，证明转染组及DADS处理后转染组的BGC823细胞的迁移能力被抑制（P<0.05）。Transwell实验结果显示，在体外经过DADS作用和将LIMK1基因沉默可降低人胃癌BGC823细胞的侵袭能力。4.DADS处理及干扰LIMK1后BGC823细胞LIMK1表达的影响RT-PCR和Western blot和免疫组化结果均显示，Limk1-miRNA4转染组和经DADS分别处理未转染组、阴性转染组和转染组24h后的LIMK1表达水平均明显低于阴性转染组和未转染组（P<0.05）。表明DADS和将LIMK1基因沉默可以抑制LIMK1的表达。5.干扰LIMK1对BGC823细胞Rac1-Rock1/Pak1-Limk1-cofilin1信号通路的影响Western blot结果均显示：转染组Rac1、Rock1、Pak1、p-cofilin1的蛋白表达水平均下降，未转染组及阴性转染组无统计学意义。cofilin1蛋白表达无差异。沉默LIMK1可抑制cofilin1的磷酸化水平和对Rac1-Rock1/Pak1通路具有抑制作用。结论：1.沉默LIMK1基因可抑制BGC823细胞增殖与迁移侵袭。2.沉默LIMK1基因可增强DADS抑制BGC823细胞增殖与迁移侵袭。3. DADS抑制BGC823细胞增殖与迁移侵袭的机制可能与阻断Rac1-Rock1/Pak1信号通路，下调LIMK1，进而抑制cofilin1磷酸化有关。