推拿对坐骨神经损伤大鼠NGF及其受体选择的研究

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目的观察推拿对坐骨神经损伤大鼠行为学、形态学、神经生长因子(NGF)、神经营养因子酪氨酸激酶受体A (TrkA)、p75神经营养因子受体(p75NTR)的影响,探讨推拿治疗坐骨神经损伤的起效机理。方法实验动物选用坐骨神经神经夹持损伤模型大鼠。动物分组采用两次随机分组,分为正常组、假手术组、模型组、模型对照组及推拿组。行为学观察主要采用斜板实验考察感觉功能恢复情况、光热耐痛阈实验考察运动功能恢复情况、体重变化及24h进食量考察大鼠疼痛反应情况;形态学检测主要采用脊髓HE染色及细胞核计数考察神经元恢复情况、腓肠肌HE染色及肌细胞直径测量考察靶组织恢复情况;NGF、TrkA及p75NTR采用免疫组织化学法定性定位分析蛋白表达情况,免疫印迹法进行定量测量蛋白表达研究。免疫组化结果使用Image pro plus6.0图象分析系统,免疫印迹法结果使用Quantity One图像软件分析。所有数据采用SPSS软件统计分析。结果行为学结果显示:①光热耐痛阈实验,干预0次,造模组与正常组相比明显升高(p<0.05),干预10次及20次后,模型组和模型对照组与正常组相比明显升高(p<0.05),推拿组与模型组相比明显降低(p<0.05),与正常组相比无显著性差异(p>0.05);②斜板实验,干预0次,造模组与正常组相比明显降低(p<0.05),治疗10次,模型组和模型对照组大鼠斜板实验角度与正常组相比明显降低(p<0.05),推拿组与模型组相比明显升高(p<0.05),与正常组相比有显著性差异(p<0.05),治疗20次,模型组和模型对照组大鼠斜板实验角度与正常组相比明显降低(p<0.05),推拿组与模型组相比明显升高(p<0.05),与正常组相比无显著性差异(p>0.05);③体重变化:造模后7天(干预0次)后,造模组大鼠体重明显轻于正常组与假手术组(p<0.05),干预10次后,推拿组大鼠体重明显高于模型组和模型对照组(p<0.05),与假手术组无明显差异(p>0.05),但仍低于正常组(p<0.05),干预20次后,推拿组大鼠体重与模型组和模型对照组之间有明显差异(p<0.05),推拿组、假手术组与正常组相比无显著性差异(p>0.05);④24h进食量:造模后7天(干预0次)后,造模组大鼠进食量明显低于正常组与假手术组(p<0.05);干预10次后,推拿组大鼠进食量明显高于模型组和模型对照组(p<0.05),与假手术组、正常组无明显差异(p>0.05);干预20次后,推拿组大鼠进食量与模型组和模型对照组之间有明显差异(p<0.05),推拿组、正常组之间相比无显著性差异(p>0.05),推拿组大鼠进食量高于假手术组(p<0.05)。形态学观察:①脊髓HE染色细胞核计数比较,造模后7天(干预0次)后,造模组明显低于正常组与假手术组(p<0.05),正常组与假手术组间无明显差异(p>0.05),干预10次后,推拿组大鼠明显高于模型组和模型对照组(p<0.05),低于假手术组和正常组(p<0.05),模型组、模型对照组与正常组相比也有统计学意义(p<0.05),干预20次后,推拿组大鼠与模型组和模型对照组之间有明显差异(p<0.05);模型组和模型对照组明显低于正常组(p<0.05);推拿组、正常组之间相比无显著性差异(p>0.05)。②腓肠肌HE染色肌细胞直径比较:造模后7天(干预0次),造模组大鼠肌细胞直径明显低于低于假手术组和正常组(p<0.05);正常组与假手术组间无明显差异(p>0.05),干预10次后,推拿组大鼠与模型组和模型对照组之间有明显差异(p<0.05);模型组和模型对照组明显低于正常组(p<0.05);推拿组仍低于正常组(p<0.05),干预20次后,推拿组与其余四组均有显著差异(p<0.05),高于模型组和模型对照组(p<0.05),与正常组无显著差异(p>0.05);模型组和模型对照组明显低于正常组(p<0.05)。NGF免疫组化及wB结果显示:干预0次,模型组与正常组较正常组明显升高(p<0.05),干预10次及20次后,模型组和模型对照组NGF积分光密度与正常组相比明显升高(p<0.05),推拿组与模型组相比明显升高(p<0.05),与正常组相比明显升高(p<0.05)。TrkA免疫组化及wB结果显示:干预0次,模型组与正常组较正常组明显升高(p<0.05),干预10次及20次后,模型组和模型对照组TrkA积分光密度与正常组相比明显升高(p<0.05),推拿组与模型组相比明显升高(p<0.05),与正常组相比明显升高(p<0.05)。p75NTR免疫组化及wB结果显示:干预0次,模型组与正常组较正常组明显升高(p<0.05),干预10次及20次后,模型组和模型对照组p75NTR积分光密度与正常组相比明显升高(p<0.05),推拿组与模型组相比明显升高(p<0.05),与正常组相比明显升高(p<0.05)。结论推拿治疗可以有效的促进坐骨神经损伤大鼠的感觉及运动功能,对大鼠的疼痛反应也具有良好的恢复效果,可促进坐骨神经损伤大鼠脊髓中NGF表达,并提高NGF高亲和受体TrkA的表达,降低低亲和力受体p75NTR的表达,从而激活NGF与TrkA结合后介导的神经再生机制,抑制NGF与p75NTR结合后介导的神经凋亡机制。推拿治疗影响NGF及其受体的表达含量,进而影响NCF对受体的选择,是推拿治疗周围神经损伤的起效机理之一
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