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目的:利用杂交瘤技术制备高特异性、高效价的抗RecQ解旋酶单克隆抗体(McAb)并对其进行初步鉴定,为肿瘤的研究和治疗提供条件。 方法:对纯化的重组大肠杆菌RecQ解旋酶进行性质鉴定后,作为免疫原免疫Balb/c小鼠,将其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,采用甲基纤维素半固体法及有限稀释法同时对融合的杂交瘤细胞进行克隆筛选,结合间接 ELISA法筛选出可分泌抗RecQ解旋酶单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞,对其进行扩大培养,并将其注入未免疫的经液体石蜡预处理的Balb/c小鼠体内诱生腹水,同时收集杂交瘤细胞培养上清液及腹水进行单克隆抗体的鉴定。用秋水仙素阻断法对杂交瘤细胞进行染色体核型分析;用间接ELISA法和Western-Blot法测定单克隆抗体特异性,用间接ELISA法鉴定单克隆抗体的Ig亚型、效价;将系列梯度稀释的抗RecQ解旋酶单克隆抗体与RecQ解旋酶结合后,再加入荧光素标记的双链DNA,用荧光偏振仪检测RecQ解旋酶结合DNA的活性,观察抗RecQ解旋酶单克隆抗体对RecQ解旋酶活性的抑制作用。 结果:应用甲基纤维素半固体法及有限稀释法,各成功获得1株能稳定分泌抗RecQ解旋酶单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别编号为6H5、1C1。两株杂交瘤细胞染色体数目均在94-104;其分泌的单克隆抗体类型均为 IgG1型;收集生长良好的杂交瘤细胞培养上清液或将其接种到液体石蜡预处理的Balb/c小鼠腹腔中制备腹水型单抗,其中6H5株所得上清液和腹水中抗体效价分别为1/103和1/107;1C1株所得上清液和腹水中抗体效价分别为1/103和1/105;间接 ELISA法和Western blot检测结果证明两株杂交瘤细胞所分泌的单克隆抗体能特异性结合RecQ解旋酶;将两株单克隆抗体梯度稀释后分别与RecQ解旋酶结合,经荧光偏振测定仪检测RecQ解旋酶结合DNA的活性,结果显示抗RecQ解旋酶单克隆抗体与RecQ解旋酶抗原在比例合适时,可抑制RecQ解旋酶的结合DNA活性。 结论:利用纯化的重组大肠杆菌RecQ解旋酶成功制备出2株可稳定分泌抗RecQ解旋酶单克隆抗体的杂交瘤细胞株,且其分泌的抗RecQ解旋酶单克隆抗体特异性高,效价高,具有生物学活性,抗体亚类为 IgG1型。为进一步研究肿瘤疾病的诊断及治疗提供了有力的工具。