间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是干细胞的一种,具有很强的自我更新和多向分化潜能。MSCs存在于动物胎儿和成体多种组织中,现有研究已经从多个物种的多种组织中提取分离出间充质干细胞,而目前研究最多的MSCs主要是骨髓源MSCs,对胎肺来源干细胞的研究还很少有报道。胎肺间充质干细胞相对于骨髓源MSCs来说有取材方便、细胞数量多、容易分离得到及体外能够大量扩增等优势,因此建立哺乳动物胎肺来源干细胞分离培养和鉴定的方法可以丰富干细胞来源、对研究细胞发育分化、建立疾病模型均有促进作用。本研究以阿尔卑斯绒山羊胎儿肺部组织为材料来源,首先分离得到可以在体外长期传代培养的间充质干细胞,之后对得到的细胞进行了形态学、生长性能、标志基因等方面鉴定,最后对间充质干细胞进行成脂、成骨、成软骨、成胰岛、成神经细胞等多胚层组织的诱导分化,验证其多能性。本研究主要是采用两步酶消化法和差速贴壁法分离阿尔卑斯绒山羊胎儿肺部组织,通过形态学观察,发现所分离出的山羊胎肺细胞形态均一,呈现成纤维样细胞形态,增殖能力旺盛,在体外传代培养,发现传至20代以上细胞仍然保持良好的生物学性状。进一步通过核型分析、生长曲线测定、免疫细胞化学、RT-PCR技术鉴定其MSCs特性。其结果显示,所分离的山羊胎肺细胞具有正常二倍体核型(2n=60)；在体外生长正常,具有稳定生物学性状；RT-PCR显示间充质干细胞标志性基因CD44表达呈阳性；免疫细胞化学检测细胞表面标记CD29、CD44、CD90、CD106基因的表达与阴性对照组相比都呈阳性,造血干细胞标志基因CD45呈阴性。表明本研究分离得到的细胞具备山羊间充质干细胞的生物学特性。在确定了适合于山羊胎肺间充质干细胞(LMSCs)培养和鉴定方法的基础上,本研究进一步对所分离的山羊胎肺间充质干细胞进行成脂、.成骨、成软骨、成胰岛、成神经细胞诱导分化实验,观察其向三胚层分化的多潜能情况。经过细胞染色、免疫细胞化学及RT-PCR技术进行鉴定,结果显示：成脂诱导后,细胞经油红-O染色可见明显脂滴,RT-PCR显示成脂细胞特异性基因PPARγ2表达呈阳性；成骨诱导经AgNO3染色后有明显钙化物质,RT-PCR显示成骨细胞特异性基因collagen Ⅰ表达呈阳性；成软骨诱导经阿利新蓝染色后呈蓝色,RT-PCR显示成软骨特异基因COL2A1表达呈阳性；成胰岛p细胞诱导后经双硫腙染色发现,有细胞团出现,并且呈猩红色,RT-PCR显示胰岛p细胞标记基因PDX1表达呈阳性；成神经细胞诱导后,经免疫细胞化学检测,发现细胞质内抗体NSE呈阳性,神经细胞特异性基因NSE表达呈阳性。以上结果表明所分离的山羊胎肺MSCs可以成功向脂肪、成骨、成软骨、神经细胞和胰岛p细胞分化,具有发育成三胚层细胞的多向分化潜能。综上所述,本研究所分离得到的山羊胎肺细胞具备间充质干细胞的生物学特性和多向分化潜能,证实我们成功建立了一套完整的山羊胎肺间充质干细胞的分离、纯化及鉴定体系,得到了山羊胎肺间充质干细胞。