第一部分瘦素诱导心肌细胞肥大作用机制 目的： 瘦素(Leptin)是一种肥胖基因(ob gene)编码的蛋白质，近年来的研究资料显示，肥胖病人血浆的Leptin浓度明显增高，血浆Leptin浓度与心肌肥厚程度密切相关。目前认为，Leptin在肥胖相关心血管疾病中发挥着重要作用。研究已经证实，Leptin能诱导心肌细胞内氧活性物质(ROS)的增加和ROS依赖的心肌细胞肥大，内皮素-1(ET-1)受体通路参与该过程，但是由于ET-1受体阻断剂并未能完全阻断Leptin的作用，说明仍有其他途径参与其中。Leptin能激活过氧化物增生因子活化受体α(PPARα)，通过激活脂肪组织的PPARα而影响脂肪酸的转运和氧化代谢，目前有研究显示，PPARα的过度表达可以造成小鼠的心肌肥厚，但PPARα活化是否涉及瘦素诱导的心肌细胞肥大仍不清楚。本课题主要探讨在瘦素诱导心肌细胞肥大的过程中PPARα所发挥的作用。 方法： 选用原代培养的新生SD乳鼠心肌细胞。细胞内荧光信号用荧光倒置显微镜检测。用ROS敏感的荧光探针2，7-dichloronuorescin dictate(DCF-DA)反映细胞内ROS水平；用RNA敏感的荧光探针碘化丙叮(PI)检测细胞内RNA含量；用考马斯亮兰法检测细胞内总蛋白含量。采用荧光定量PCR法检测心肌细胞内PPARα mRNA表达的变化，Western-blot法检测心肌细胞PPARα蛋白表达的变化。 结论： Leptin能够剂量依赖性的诱导心肌细胞内PPARα mRNA和蛋白表达增加；PPARα拮抗剂可以抑制Leptin诱导的心肌细胞内ROS含量增加和心肌细胞肥大；PPARα的活化在Leptin诱导的心肌细胞内ROS含量增加和心肌细胞肥大的过程中发挥重要的介导作用。 第二部分内源性肾上腺糖皮质激素对内毒素诱导的血管炎症反应抑制作用研究 目的: 血管内皮的损伤与多种心血管疾病相关，是心血管疾病的独立危险因素。氧化应激和炎症反应已被确认为血管内皮细胞损伤的重要机制，但目前对内源性抗炎系统在炎症反应的调控作用认识还处于初级阶段。本实验研究目的是探讨生理水平肾上腺糖皮质激素对血管炎症反应的抑制作用。 方法： 本实验分体内试验和体外试验两部分。(1)体外试验：原代培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)，经形态学和免疫组化鉴定后，用第3-5代进行试验。分别给予0-80 μg/ml等不同浓度的脂多糖(LPS)作用内皮细胞2小时，收集细胞上清液；同时用10 μg/ml刺激细胞，分别在0、30分钟、1小时、2小时、4小时、8小时等6个时间点收集细胞上清液，用ELISA法检测TNF-α含量。(2)体内试验：将180-220 g正常SD大鼠分为三大组，分别给予不同浓度的RU486(肾上腺糖皮质激素拮抗剂)、不同浓度的TSA(HDAC抑制剂)和摘除双侧肾上腺处理后，以1 mg/kg腹腔注射LPS，作用1小时，取大鼠胸主动脉提取组织蛋白，ELISA法检测TNF-α含量。 结论： 分别阻断糖皮质激素受体、抑制HDAC的活性以及去除双侧肾上腺，均可见TNF-α的含量明显增加，提示内源性的肾上腺糖皮质激素存在着抗炎作用，对血管有保护效应，其具体抗炎机制及意义将在今后的试验中进一步探讨。