【摘 要】
：
大熊猫种群中犬瘟热病毒（CDV）、犬细小病毒（CPV）感染不时给大熊猫种群安全带来不良影响,且还无安全有效的疫苗可供应用。病毒样颗粒（VLPs）与天然病毒颗粒相似但不含核酸,有较好的安全性与免疫效果,研制CDV/CPV VLPs对于防控大熊猫CDV/CPV感染具有重要的意义。本研究通过原核表达设计制备展示犬瘟热病毒抗原表位的大熊猫源犬细小病毒病毒样颗粒,通过动物免疫实验检测所制备的CDV/CPV
论文部分内容阅读
大熊猫种群中犬瘟热病毒（CDV）、犬细小病毒（CPV）感染不时给大熊猫种群安全带来不良影响,且还无安全有效的疫苗可供应用。病毒样颗粒（VLPs）与天然病毒颗粒相似但不含核酸,有较好的安全性与免疫效果,研制CDV/CPV VLPs对于防控大熊猫CDV/CPV感染具有重要的意义。本研究通过原核表达设计制备展示犬瘟热病毒抗原表位的大熊猫源犬细小病毒病毒样颗粒,通过动物免疫实验检测所制备的CDV/CPV VLPs的免疫原性,以评估其作为大熊猫CDV/CPV候选疫苗的潜力。研究结果如下:1.CPV-VP2表达条件的优化及纯化将大熊猫源犬细小病毒的VP2基因插入pCold Ⅰ表达载体中,构建了重组质粒pCold Ⅰ-VP2,通过优化表达宿主菌、诱导剂浓度、共表达分子伴侣、促溶标签等表达条件,提高目的蛋白的可溶性。通过筛选比较,pCold Ⅰ-TF-VP2重组质粒转化的BL21（DE3）宿主菌在含0.2m M的IPTG诱导条件下能得到最多量可溶性VP2蛋白。2.嵌合CDV抗原表位的CPV病毒样颗粒的制备VP2蛋白是CPV的主要衣壳蛋白,体外表达的VP2蛋白在一定条件下能自组装形成CPV-VLPs。在CPV-VP2的N端和Loop2区域插入CDV抗原表位形成嵌合型VLPs。通过SDS-PAGE电泳分析显示,在嵌入CDV抗原表位后,VP2蛋白的可溶性几乎不受影响。WB分析酶切纯化后得到的重组蛋白,重组蛋白能与CDV/CPV抗体所结合,在约70k Da处出现大小正确特异性的条带。血凝试验显示,VP2-VLPs的血凝效价为1:28,VP2L-VLPs和VP2N-VLPs的血凝效价为1:27,表明重组蛋白具有血凝活性。所制备的病毒样颗粒经透射电镜观察,均能形成直径大小约为25nm的圆形粒子,形态结构与CPV天然病毒粒子相似,表明嵌合型病毒样颗粒制备成功。3.病毒样颗粒免疫原性的研究病毒样颗粒免疫小鼠后,用ELISA方法检测抗体效价,结果显示各组VLPs能诱导产生高水平的CPV/CDV抗体;HI试验显示,各免疫组血清HI效价消长趋势相同,都在42d是达到顶峰(约为1:211);细胞中和试验表明,VP2N-VLPs组的平均中和抗体效价为1:26.65,略高于VP2L-VLPs组的1:26.58和弱毒疫苗组的1:26.21;脾淋巴细胞增殖试验证明两组病毒样颗粒免疫的小鼠,其脾脏淋巴细胞在特异性抗原刺激后,能迅速增殖。本研究成功构建了嵌合有犬瘟热病毒抗原表位的大熊猫源犬细小病毒病毒样颗粒,通过免疫小鼠证实,该嵌合型病毒样颗粒可以较好的诱导机体产生特异性的体液免疫及细胞免疫应答,具有成为高效、安全的新型亚单位疫苗的研究潜力。
其他文献
外生菌根（Ectomycorrhiza,ECM）真菌是一类能够与植物根系共生的真菌,在促进植物生长、提高植物抗逆能力、调节根际微环境、稳定植物群落等方面有重要作用。马尾松（Pinus massoniana）是我国南方各省区重要的速生、经济、先锋、用材树种,在我国林业生产及森林生态系统中占有极其重要的地位。马尾松作为一种广谱性ECM真菌共生树种,能与多种ECM真菌共生形成菌根,林下ECM真菌资源丰富
鸭瘟病毒（Duck plague virus,DPV）属于α疱疹病毒亚科成员,在α疱疹病毒亚科中,UL6蛋白一般在细胞核内发挥功能,但是目前对于DPV UL6蛋白如何进入细胞核这一问题尚未阐明。本文通过构建重组病毒以及间接免疫荧光等实验方法发现UL6蛋白定位于细胞核内,并进一步阐明DPV UL6蛋白的入核机制,以及对构建的病毒突变株进行疫苗潜力评价。围绕上述目的,进行的主要研究内容以及获得的结果如
目的:在耳内镜下使用自体听骨对慢性化脓性中耳炎患者进行鼓室成形并听骨链重建术,观察其短期疗效以及预后影响因素。方法:回顾性分析解放军联勤保障部队第九二一医院耳鼻喉科于2015年5月至2021年1月期间治疗的43例（耳）慢性化脓性中耳炎患者的临床资料,所有患者均使用自体听骨在耳内镜下行鼓室成形并听骨链重建术,探讨患者术后的疗效及影响其术后听力恢复效果的因素,所有的患者手术前后均行听力学评估,并统计在
类胡萝卜素是一类重要的天然色素的总称,在自然界中广泛存在,具有特殊生理功能和药理功能,对人类身体健康有着非常重要的作用。但人体自身无法合成类胡萝卜素,需从外界摄取。猕猴桃作为一种高营养风味佳的水果,一直以来都受到消费者的喜爱,除了高含量的维生素C,也含有丰富的类胡萝卜素。本试验以猕猴桃果实为材料,比较了13份材料类胡萝卜素含量的差异;研究了黄肉猕猴桃果实生长发育期类胡萝卜素的积累水平及相关基因的表
随着退耕还林、天然林保护和龙泉山脉生态植被恢复工程等林业项目的实施,金堂县森林昆虫种类发生了较大变化。本实验通过线路调查与标准地调查等方式采集标本建立和完善了金堂县森林昆虫种类数据库;以占科数及物种数比例最大的鞘翅目有害昆虫为代表进行生物多样性研究,了解到森林昆虫的发生规律;并对部分分布广、发生面积大的林业害虫进行风险性分析,为以后开展预防和治理提供了基础数据。主要结论如下:（1）森林昆虫调查表明
为探究蜡样芽孢杆菌PAS38影响肉鸡免疫的分子机制,将60羽7日龄肉鸡分为2组,对照组饲喂基础日粮,试验组饲喂试含蜡样芽孢杆菌PAS38 1×106 CFU/g的基础日粮;于42日龄时从每个组随机取6只肉鸡,解剖采取脾脏、胸腺和法氏囊,采用SSH技术构建差异基因文库,并对文库进行GO注释,筛选得到免疫相关差异基因;最后利用siRNA技术干扰部分差异基因在肉鸡淋巴细胞中的表达,检测IL-1B、IL-
随着传统能源危机的加剧和环境问题的日益突出,人类日益重视对核能的开发与利用。我国提出巨型激光装置的研制计划,其承担着开启惯性约束核聚变的重大任务。数千特种实验模块的转运与装校是巨型激光装置研制中的关键一环,其需要数十台甚至上百台特种实验模块装校系统。在重负载条件工况下,特种实验模块装校系统耗能特别多,会减少电池使用时间,降低工作效率,因此在进行工作过程中,减少能量消耗是需要解决的一个重要问题。鉴于
鸭瘟病毒（Duck plague virus,DPV）能够引起鸭、鹅、大雁等雁形目禽类的急性、热性、败血性传染病。本论文构建了DPV LORF4基因缺失病毒,观察了该缺失病毒的毒力变化并对其免疫效果进行了评价。研究内容和结果如下:1.DPV-CHvΔLORF4缺失病毒构建利用本实验室构建的DPV CHv株细菌人工染色体（Bacterial Artificial Chromosome,BAC）平台以
伪狂犬病毒属疱疹病毒科,可感染家畜和野生动物,猪是主要的宿主和传染源,仔猪一旦被感染,死亡率可达100%。目前尚无特效治疗药,多为疫苗防控。但由于病毒变异导致毒力增强和动物个体天然免疫力低下,常造成接种失败。已有研究发现,在接种疫苗时,配合适当的免疫增强剂,可提高接种成功率。实验室前期研究表明,白藜芦醇（Resveratrol,Res）具有免疫调节作用。本研究选择小鼠为试验动物,拟通过检测受免小鼠
林木种质资源是林木遗传多样性载体和林木遗传改良及新品种选育的基础材料,对林业经济和生态文明建设有重要的战略意义。查清资源现状和分布规律,总结地理空间特征是林木种质资源合理保护、高效利用、永续开发的前提。德昌县拥有丰富的林木种质资源,包含了极高水平的木本植物多样性和遗传多样性,是维持四川西南地区生态稳定的关键资源循环地。查清德昌县林木种质资源分布现状,分析其地理空间特征,可为制定资源长期保护和利用规