近年来,嵌合抗原受体T细胞（Chimeric Antigen Receptor-T cell,CAR-T细胞）在B细胞白血病治疗方面已经取得了巨大的成就,但在B细胞淋巴瘤和实体瘤的治疗方面仍存在一定的局限性。优化CAR的结构从而提高CAR-T细胞的持续性和细胞毒性是CAR-T免疫治疗的新焦点。共刺激信号域是CAR-T细胞的重要组成部分,整合了CD28共刺激分子的CAR-T细胞能够快速增殖,但持续性较差,而包含4-1BB共刺激分子的CAR-T细胞具有更强的持续性。所以,在目前CAR分子的设计中,4-1BB信号被整合到CAR分子中。在天然T细胞的活化过程,4-1BB信号独立于TCR信号而存在。然而,目前对于独立表达的4-1BB信号是否能够增强基于28Z CAR-T细胞的持续性的研究尚不明确。本研究以CD20作为靶点,在2028Z的二代CAR的基础上,添加4-1BB共刺激受体,以此来构建新型CAR分子结构。利用基因重组和慢病毒感染的方式构建CAR-T细胞。在体外的扩大培养中,CAR-T细胞经抗原定期刺激,通过统计细胞的数量,比较CAR-T细胞的增殖能力。利用流式细胞术检测CAR-T细胞的分化及耗竭相关分子的表达,说明CAR-T细胞的分化及耗竭情况。以肿瘤细胞的剩余量作为CAR-T细胞体外抗肿瘤能力的评估指标。通过分析小鼠体内肿瘤负荷及小鼠的生存期,来评估CAR-T细胞体内的抗肿瘤效果。实验结果表明,体外培养条件下,与2028Z CAR-T细胞相比,2028Z-4-1BB CAR-T细胞显示多种优势包括:显著性增强的增殖能力和抗肿瘤杀伤能力,以及更低的凋亡与耗竭;此外,2028Z CAR-T细胞在淋巴瘤小鼠肿瘤模型中,呈现出更强的持续性和肿瘤抑制效果。进一步的机制研究,发现组成型4-1BB共刺激信号,增强了NF-кB信号通路的活化水平,显著性降低了CAR-T细胞的凋亡和PD-1的表达,从而增强了CAR-T细胞的增殖能力及抗肿瘤活性。组成型4-1BB共刺激信号,增强了CAR-T细胞的持续性及抗肿瘤活性。本研究为优化CAR-T细胞抗淋巴瘤的功能,提供了新的策略。