两种导光系统对变形链球菌生物膜影响的对比研究

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目的:本实验对比Nd:YAG激光在使用不同导光系统时对体外培养的变形链球菌(Streptococcus mutans,S.mutans)生物膜的形成影响及杀灭作用。通过测定变形链球菌形成的生物膜的OD值研究两者对变形链球菌成膜能力的影响。通过平板菌落计数法及激光共聚焦法检测两者对变形链球菌生物膜的杀灭作用。通过K型热电偶温度测量仪测量两者对髓腔温度变化的影响。通过对两种导光系统的灭菌效果及安全性的研究,探讨其灭菌的最佳功率,以期为临床提供一种新型有效的防龋方法。方法:1.两种导光系统对变形链球菌成膜能力的影响变形链球菌标准株活化及制备菌液,菌液稀释后置于96孔板中,将其分为传统的直接出光石英光纤组(组1~组4)以传统的直接出光石英光纤照射变形链球菌菌液,功率分别为1.6w、1.8w、2.0w、2.2w,每组4个样本;侧面发光光纤组(组5~组8)以侧面发光光纤照射变形链球菌菌液,功率分别为1.6w、1.8w、2.0w、2.2w,每组4个样本;对照组(Con组)不作处理。各组处理后厌氧培养24小时,结晶紫染色法测定各组OD(optical density,光密度)值,定量分析两种导光系统对变形链球菌成膜能力的影响。2.两种导光系统对变形链球菌生物膜的杀灭作用变形链球菌标准株活化及制备菌液,在14mm*14mm的细胞爬片上构建变形链球菌生物膜模型,将其分为传统的直接出光石英光纤组(组1~组4)以传统的直接出光石英光纤照射变形链球菌生物膜,功率分别为1.6w、1.8w、2.0w、2.2w,每组4个样本;侧面发光光纤组(组5~组8)以侧面发光光纤照射变形链球菌生物膜,功率分别为1.6w、1.8w、2.0w、2.2w,每组4个样本;对照组(Con组)。各组处理后进行平板菌落计数。定量分析两种导光系统对变形链球菌生物膜的杀灭作用。使用活死菌染色试剂盒对激光处理过的样本及对照组样本进行染色,激光共聚焦显微镜观察染色结果,进行图像的采集与处理。定性分析两种导光系统对变形链球菌生物膜的杀灭作用。3.两种导光系统使用安全性的评估制备离体牙牙冠,使用K型热电偶测温仪测量两种导光系统在1.6w、1.8w、2.0w、2.2w照射牙冠时牙髓腔产生的温度变化。分析评定两种导光系统的安全性。结果:1.结晶紫染色结果显示:在功率为1.6w时,两种导光系统与对照组的OD值相比均无统计学差异(p>0.05),而在1.8W、2.0w、2.2w,两种导光系统与对照组的OD值相比有显著性差异,有统计学意义(p<0.05)。两种导光系统对比,其OD值差异在1.6w、1.8w、2.0w、2.2w时均无统计学意义(p>0.05)。2.平板菌落计数显示与空白对照组相比,两种导光系统(组1~组8)均显示出菌落数量减少,差异有统计学意义(p<0.05)。在传统的直接出光石英光纤组中,功率越大,灭菌效果越优异,差异均有统计学意义(p<0.05);侧面发光光纤组中,2.0w灭菌效果优于1.8w,1.8w的灭菌效果优于1.6w、差异均有统计学意义(p<0.05),2.0w与2.2w灭菌效果无统计学意义(p>0.05)。两种导光系统相比,功率为1.6w、1.8w时,传统的直接出光石英光纤组的灭菌效果优于侧面发光光纤组的,差异有统计学意义(p<0.05)。在功率为2.0w、2.2w时传统的直接出光石英光纤组的灭菌效果与侧面发光光纤组相比差异无统计学意义(p>0.05)。根据激光共聚焦图像显示,两种导光系统组在2.0w、2.2w,时,可见大面积红色信号,绿色信号较少,在1.8w时可明显观察到绿色信号增多,1.6w时绿色信号及橙色信号继续增多。而生理盐水组则显示为绿色、黄色信号较多,红色信号较少。根据激光共聚焦信息分析,与对照组相比,两种导光系统均显示出明显的活菌比例的降低,差异具有统计学意义(p<0.05)。传统的直接出光石英光纤组中,功率为1.6w,1.8w,2.0w时,随着功率的增加,活菌比例逐渐降低,差异具有统计学意义(p<0.05);而功率2.0w与2.2w相比时,活菌比例无显著性差异,无统计学意义(p>0.05)。侧面发光光纤组在功率为1.6w,1.8w,2.0w时,随着功率的增加,活菌比例降低,差异具有统计学意义(p<0.05);而功率为2,0w与2.2w时,活菌比例显著性差异,不具备统计学意义(p>0.05)。两种导光系统相比:在1.6w时,传统的直接出光石英光纤组的活菌比例明显低于侧面发光光纤组,具有统计学意义(p<0.05),而在1.8w,2.0w,2.2w时两种导光系统活菌比例无显著性差异,无统计学意义(p>0.05)。3.温度测试显示在两种导光系统组中,随功率的增加,各组髓腔温度的变化也在增加。而传统的直接出光石英光纤组各功率组的髓腔温度的变化均大于侧面发光光纤组。传统的直接出光石英光纤组在2.2w时髓腔温度变化大于5℃。结论:实验结果显示两种导光系统均能对变形链球菌的成膜能力产生抑制作用。两种导光系统对变形链球菌生物膜均有杀灭作用,功率为2w时可同时满足安全有效的原则。在功率为2w时两者灭菌效果无显著性差异,但侧面发光光纤组安全性更高。
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