【摘 要】
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反转录-PCR扩增获得甜菜坏死黄脉病毒(BNYVV)内蒙分离物RNA3全长cDNA,序列分析结果,RNA3基因组全长为1775nt.与法国F2分离物、德国G1分离物和日本S分离物相比,其核苷酸序列的
【出 处】
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中国科学院遗传学研究所 中国科学院遗传与发育生物学研究所
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反转录-PCR扩增获得甜菜坏死黄脉病毒(BNYVV)内蒙分离物RNA3全长cDNA,序列分析结果,RNA3基因组全长为1775nt.与法国F2分离物、德国G1分离物和日本S分离物相比,其核苷酸序列的同源性分别为96.4%、96.8%和97.3%.将RNA3 25kDa蛋白编码基因和RNA4 31kDa蛋白编码基因分别克隆到pJW2和pQE32上,构建了这两个基因的原核表达载体.SDS-PAGE和Western bloting分析结果表明,25kDa蛋白基因和31kDa蛋白基因在E.coli中均可特异地表达.构建了 RNA4及其自然缺失突变体(△402)的植物表达载体,对甜菜的遗传转化工作正在进行之中.以小麦黄色花叶病毒(WYMV)和小麦梭条花叶病毒(WSSMV)的特异性序列为引物,逆转录-PCR方法并配合免疫电镜观察,对采自中国长江中下游、淮河及渭河流域5省9个县(市)的27份感病田小麦样品进行检测.除2份样品未检测到病毒外,其余25份样品均为WYMV所侵染,没有发现WSSMV.对WYMV三个分离物的CP基因的变异分析发现,不同分离物核苷酸的序列同源性为97.1-97.7%,由此推导的氨基酸序列同源性为96.6-97.6%.将WYWV外壳蛋白(CP)基因及其5端缺失突变体分别克隆到pQE30和pQE31上,构建了大肠杆菌表达载体pQWCP和pQWCP-C.SDS-PAGE和Western印迹结果表明,经IPTG诱导,pQWCP和pQWCP-C可特异表达34kDa和24kKa的融合蛋白.
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