rhBMP-2与bFGF在小鼠异位成骨中的协同作用实验研究

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目的:通过观察人重组骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)复合材料在小鼠体内诱导异位成骨的效果,探讨两者联合应用时的协同效能与作用机制。方法:将24只昆明种雄性小鼠随机分成6组,即A组(空白对照组)、B组(单纯胶原组)、C组(bFGF(2ng)+胶原组)、D组(rhBMP-2(4μg)+胶原组)、E组(rhBMP-2(4μg)+bFGF(2ng)+胶原组)、F组(rhBMP-2(4μg)+bFGF(4ng)+胶原组),每组4只小鼠,将复合材料植入于小鼠双侧后肢肌间隙内,空白对照组只分离肌间隙不植入材料。术后2周处死小鼠,取材进行大体观察、钙含量浓度测定、显微CT(Micro-CT)三维重建扫描及骨矿物质密度(BMD)、骨体积分数(BVF)与骨小梁厚度(Tb.Th)检测,以及HE染色与ALP、CD34免疫组化染色下的组织学观察。结果:⑴大体观察:A、B、C组未见异位成骨,D、E、F组可见异位成骨块。⑵钙含量浓度测定:E组(39.53±3.01mg/dL)与D组(26.01±4.64mg/dL)间的差异有统计学意义(P<0.05),E、F组(35.67±3.46mg/dL)间与D、F组间的差异无统计学意义(P>0.05)。⑶Micro-CT三维重建示D、E、F组异位成骨块外层有连续性新生骨质,骨块中心未见明显实质性骨质充填。骨矿物质密度(BMD):E组(364.31±43.17mg/cc)与D组(235.03±47.96mg/cc)间的差异有统计学意义(P<0.01);骨体积分数(BVF):E组(97.62±0.88%)、F组(93.85±4.70%)与D组(83.13±2.45%)的差异有统计学意义(P<0.01、P<0.05);骨小梁厚度(Tb.Th):E组(337.65±26.70μm)、F组(251.10±37.85μm)与D组(161.19±13.57μm)的差异有统计学意义(P<0.01、P<0.05)。⑷组织学观察:HE染色见D、E、F组新生骨质主要位于异位骨块边缘,E、F组成骨效果优于D组;ALP及CD34免疫组化染色见阳性表达主要位于异位骨块边缘,E、F组阳性表达区域多于D组。结论: rhBMP-2具有单独诱导异位成骨能力,bFGF不具有单独诱导异位成骨的能力,rhBMP-2与bFGF联合应用对诱导异位成骨有协同作用。
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