论文部分内容阅读
目的：应用免疫共沉淀技术(co-immunoprecipitation, co-IP)与蛋白免疫印迹法(Western blotting, WB)相结合的方法初步证实核转录因子(Nuclear factor kappa B,NF-κB)与激活蛋白-1(Activator protein1, AP-1)在足月妊娠自然临产后人类子宫下段平滑肌中存在相互作用。方法：实验分为足月妊娠自然临产组(以下简称临产组)、足月妊娠未临产组(以下简称未临产组)、未孕组,首先通过WB了解各组组织中核蛋白的提取情况,并初步了解NF-κB与AP-1在三组组织中的表达情况。再使用anti-NF-KB p65抗体对三组总蛋白进行co-IP实验,同时使用正常兔IgG对临产组总蛋白进行co-IP实验,目的是富集转录因子NF-κB及与其相互作用的转录因子。对co-IP下的蛋白复合物进行WB验证,鉴定anti-NF-KB p65抗体结合下来的总蛋白中是否存在转录因子AP-1；接下来,使用anti-c-Jun抗体对三组总蛋白进行co-IP实验,同时使用正常兔IgG对临产组总蛋白进行co-IP实验,目的是富集转录因子AP-1及与其相互作用的转录因子。对co-IP下的蛋白复合物进行WB验证,鉴定anti-c-Jun抗体结合下来的蛋白复合物中是否存在转录因子NF-κB。结果：1.WB结果显示核蛋白提取成功,NF-κB与AP-1在三组组织中都有表达。2.IB验证anti-NF-κB P65抗体pull down下的蛋白复合物中在临产组、未临产组中36KD处有条带,在未孕组、临产组IgG中没有条带；在临产组、未临产组中两条带测得灰度值比值为：4：1。3.IB验证anti-c-Jun抗体pull down下的蛋白复合物中在临产组、未临产组中65KD处有条带,在未孕组、临产组IgG中没有条带；在临产组、未临产组中两条带测得灰度值比值为：2.6：1。结论：NF-κB与AP-1在足月妊娠临产前后的人类子宫下段平滑肌组织中存在特异性的相互作用,且在二者的相互作用临产后显著增强。