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本研究从芝田硫化叶菌(Sulfolobusshibatae)的基因组中克隆得到了一个编码ATP依赖型DNA连接酶(Ssh连接酶)的基因,并在大肠杆菌里对该基因进行了高效表达。纯化的重组蛋白以单体形式存在,在ATP及二价阳离子(Mn2+、Mg2+或Ca2+)存在时能够封闭DNA底物上的切刻。
本论文采用酵母双杂交方法分析了硫磺矿硫化叶菌基因组中推测为参与DNA复制的21个蛋白质之间的相互作用。在低严谨筛选条件(SD-His/Leu/Trp)下,检测到33对相互作用。在中度严谨筛选条件(SD-His/Leu/Trp+5mM3-AT)下,检测到13对相互作用。在高度严谨筛选条件(SD-Ade/Leu/Trp),检测到6对相互作用。其中,PCNA-like与PCNA-1、PCNA-2之间存在强相互作用,提示PCNA-like与另外两个PCNA类似物之间的结合无先后顺序。发现SSO0557蛋白与推测为引发酶的SSO1048之间存在强相互作用,提示SSO0557蛋白为该菌引发酶的非催化亚基。还发现,RFC小亚基和引发酶催化亚基之间存在强相互作用,SSO0557蛋白与RFC的大小亚基都有较强的相互作用,因此,RFC可能通过与引发酶的相互作用被装配到DNA上去。根据本研究结果,对古菌DNA复制起始模型进行了补充。