论文部分内容阅读
本研究以大米蛋白为原料，探讨大米蛋白酶解物的抗氧化作用。通过体外试验，确定大米蛋白最佳酶解条件及最佳抗氧化效果的添加剂量；进一步采用昆明系小鼠体内试验，研究大米蛋白酶解物对正常小鼠血浆、肝脏和肾脏抗氧化功能的影响，旨在为大米蛋白抗氧化肽的开发利用提供科学依据。一、大米蛋白抗氧化酶解条件的优化试验选用枯草杆菌蛋白酶、木瓜蛋白酶和胃蛋白酶酶解大米蛋白，以羟自由基清除率作为测定指标，通过单因素和正交试验优化酶解条件，确定不同蛋白酶酶解大米蛋白的最佳酶解条件：（1）枯草杆菌蛋白酶：pH7.5、酶浓度7.0％、温度55℃和时间200min，在此条件下羟自由基清除率为79.59％，多肽浓度为8.54mg／mL；（2）木瓜蛋白酶：pH7.0、酶浓度5.0％、温度55℃和时间100min，在此条件下羟自由基清除率为52.80％，多肽浓度为1.88mg／mL；（3）胃蛋白酶：pH1.0、酶浓度5％、温度37℃和时间200min，在此条件下，羟自由基清除率为61.04％，多肽浓度为7.35mg／mL。二、大米蛋白最佳抗氧化蛋白酶的筛选试验采用正交试验优化得出的三种蛋白酶（枯草杆菌蛋白酶、胃蛋白酶和木瓜蛋白酶）的最优抗氧化酶解条件，对每个正交试验的最佳酶解产物采用同一批次进行比较，分别测定了不同处理下总还原性、羟基自由基、DPPH自由基、小鼠肝线粒体肿胀及肝组织匀浆液脂质过氧化作用的影响。结果表明：（1）不同处理的大米蛋白酶解物在体外表现出明显的清除自由基，抑制组织脂质过氧化反应，且抗氧化活性显著高于未酶解的大米蛋白；（2）不同大米蛋白酶解物抗氧化活性大小为：RPHP＞RPHS＞RPHM。（3）体外条件下大米蛋白的最佳抗氧化酶解条件为：胃蛋白酶，pH1.0、酶浓度5％、温度37℃和酶解时间200min。三、大米蛋白酶解物RPHP体外清除自由基及抗脂质过氧化作用研究试验采用比色法测定了不同剂量的大米蛋白酶解物对清除超氧阴离子、羟自由基、DPPH自由基及抗脂质过氧化的作用。结果表明：（1）大米蛋白酶解物能有效地清除自由基O2-、OH及DPPH，在50mg pro／mL时，对活性氧自由基清除效果最佳；（2）大米蛋白酶解物可抑制小鼠肝组织的脂质过氧化，尤其对Fe2+诱导的肝组织过氧化损伤更具有保护作用且在50mg pro／mL时效果最强；能减少红细胞溶血的发生；（3）大米蛋白酶解物在体外试验中具有抗氧化活性，且在10-50mg pro／mL作用最佳。四、大米蛋白酶解物对正常小鼠抗氧化功能的影响试验选用纯昆明系小鼠60只，随机分为6组，分别为：正常对照组（C），VitaminE组（VE），大米蛋白酶解物低剂量组（RPH-1），大米蛋白酶解物中剂量组（RPH-2），大米蛋白酶解物高剂量组（RPH-3），大米蛋白组（RP）。分别每天灌胃0.25mL／只生理盐水，10mg／mL VE，5.0，10.0和20.0mg／mL大米蛋白酶解物以及未经酶解处理的大米蛋白，连续灌胃14天，处死小鼠，检测血浆、肝脏和肾脏超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、过氧化氢酶（CAT）活性以及丙二醛（MDA）含量。结果表明：不同剂量的大米蛋白酶解物均能显著增强小鼠血浆、肝脏和肾脏的抗氧化功能，而未酶解大米蛋白这种活性较弱。其中，大米蛋白酶解中剂量组（RPH-2）能显著提高小鼠血浆、肝脏和肾脏抗氧化酶活性（P＜0.05），并且能显著降低血浆、肝脏和肾脏的MDA浓度（P＜0.05），其抗氧化效果最为全面。VE能显著降低血浆、肝脏和肾脏组织MDA含量，提高肝脏CAT活性，提高血浆GSH-Px活性（P＜0.05）；但对血浆SOD活性，肝脏和肾脏SOD和GSH-Px活性以及肾脏CAT活性均无显著影响（P＞0.05）。